Название (рус.)
НАБОР ДЛЯ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ ВЕЗИКУЛЯРНОЙ БОЛЕЗНИ (ВБС) И ВЕЗИКУЛЯРНОЙ ЭКЗАНТЕМЫ СВИНЕЙ (ВЭС)
Состав и форма выпуска
В состав набора входят: антигены вируса ВБС, штамм О-72 - 0,5 мл - 3 ампулы (флакона); Т-75 - 0,5 мл - 3 ампулы; антигены вируса ВЭС, штамм С-72 - 0,5 мл - 3 ампулы; штамм А-48 - 0,5 мл - 3 ампулы; сыворотки гипериммунные к вирусу ВБС, штамм О-72 - 0,5 мл - 2 ампулы (флакона), штамм Т-75 - 0,5 мл - 2 ампулы; сыворотки гипериммунные к вирусу ВЭС С-72 - 0,5 мл - 2 ампулы, А-48 - 0,5 мл - 2 ампулы. Антигены и сыворотки ВЕС и ВЭС представляют собой сухую гомогенную аморфную массу серо-белого или кремового цвета, которая после растворения в физиологическом растворе через 2 - 3 минуты должна принять вид прозрачного или слабо опалесцирующего раствора без примесей. Компоненты, не входящие в состав набора, необходимые для постановки РСК: Гемолизин - сыворотка кроликов, гипериммунизированных эритроцитами барана; Комплемент - сухая нормальная сыворотка морских свинок; Эритроциты барана - 2 % взвесь (из осадка отмытых эритроцитов) на физиологическом растворе; Физиологический раствор (ФР) - 0,85 % раствор химически чистой поваренной соли на дистиллированной воде. Компоненты набора выпускают по 0,5 мл в стерильных флаконах или в стерильных ампулах.
Фармакологические свойства
Гипериммунные сыворотки, входящие в состав набора, используют в РСК для идентификации возбудителей ВВС и ВЭС и дифференциации их от вируса ящура и везикулярного стоматита. Эталонные антигены, входящие в набор, предназначены для контроля в РСК специфичности и активности гипериммунных сывороток.
Показания
Для диагностических исследований в лабораториях, занимающихся выделением и идентификацией возбудителей заболеваний, протекающих с везикулярным синдромом.
Дозы и способ применения
Перед применением сухие компоненты набора растворяют в 0,5 мл физиологического раствора и используют для постановки РСК. Подготовка компонентов. Гемолизин. Для определения титра гемолизина из него готовят серию разведении на ФР и затем испытывают его активность, для чего готовят разведение 1 : 100 (0,2 мл гемолизина разводят в 9,8 мл ФР). Затем в отдельной пробирке готовят следующее разведение гемолизина 1 : 1000, для чего к 1,0 мл его и разведении 1 : 100 добавляют 9,0 мл ФР. Это разведение является основным, из которого готовят все последующие разведения. 1 : 1500, 1 : 2000, 1 : 3000, 1 : 4000 и т. д. Схема титрования гемолизина представлена в таблице:
Компоненты
Разведения гемолизина
1 : 1000
1 : 1500
1 : 2000
1 : 3000
1 : 4000
1 : 5000
Гемолизин, мл
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
Физиологический раствор, мл
1
1
1
1
1
1
Комплемент в разведении 1 : 20, мл
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
Эритроциты, 2 % взвесь, мл
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
После внесения компонентов смесь выдерживают в водяной бане при температуре 37 °С, после чего проводят учет реакции. Титром гемолизина считается наивысшее разведение, дающее полный гемолиз эритроцитов. Рабочим разведением гемолизина считается его четырехкратная концентрация от предельного титра (например, предельный титр 1 : 3000, рабочее разведение будет 1 : 750). Поскольку гемолизин, выпускаемый биофабрикой, консервирован глицерином, для приготовления рабочего разведения, его берут вдвое больше, т. е. 2 : 750 или 0,2 мл гемолизина и 74,8 мл ФР. Титрованный гемолизин в рабочем разведении смешивают с равным количеством 2 % взвеси эритроцитов. Полученная смесь называется гемолитической системой. Примечание: титрование гемолизина проводят один раз для новой партии коммерческого препарата, в дальнейшем в реакции используют препарат с уже установленным титром. Эритроциты. Полученную кровь барана дефибринируют, фильтруют через марлю, центрифугируют 10 минут при 2000 - 3000 об/мин. Надосадок отсасывают, а к осадку приливают 8 -10-кратное количество ФР, все тщательно перемешивают и снова центрифугируют, как указано выше. Эту операцию проводят до тех пор, пока жидкость в надосадке будет бесцветной. По окончании отмывания эритроцитов жидкость над осадком тщательно отсасывают пипеткой, а из осадка эритроцитов готовят 2 % взвесь, для чего к 2,0 мл эритроцитов добавляют 98,0 мл ФР. Комплемент. Титрование комплемента ведут в гемолитической системе и обязательно в день постанови реакции. Вначале делают разведение комплемента 1 : 20, затем из него готовят разведения в следующих дозах: 0,05; 0,1; 0,15; 0,2; 0,25 и т. д. до 0,4 мл и добавляют компоненты реакции по схеме:
%-ное содержание цельного комплемента в дозе
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
4
Комплемент 1 : 20, мл
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
0,4
ФР, мл
0,45
0,4
0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
Гемолизин в рабочем титре, мл
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
Эритроциты, 2 % взвесь
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
ФР (вместо антигена и сыворотки), см3
1
1
1
1
1
1
1
1
После внесения компонентов смесь помещают в водяную баню на 15 минут при 37 °С. Титром комплемента считают его наименьшее количество, дающее полный гемолиз эритроцитов. В дальнейшем для постановки главного опыта комплемент берут с постоянным излишком в 2 условные единицы от титра его в гемолитической системе. Например, если титр комплемента в гемолитической системе 1,5 % (см. схему титрования комплемента), для получения рабочего разведения следует взять 2,5 %, при этом разведение комплемента в главный опыт делают из нативного (цельного) комплемента. Главный опыт. При определении типов ВЭС и ВБС позитивные гипериммунные сыворотки и антигены не титруют, а используют их в удвоенных титрах. Например, если предельный титр сыворотки, указанный на этикетке, 1 : 40, то удвоенным титром ее будет разведение 1 : 20; если предельный титр антигена 1 : 8, то удвоенным его титром будет разведение 1 : 4. В качестве испытуемого антигена используют содержимое и стенки афт, а также культуральные суспензии или ткани органов лабораторных животных. Подготовка афтозного материала. Стенки афт промывают ФР, высушивают фильтровальной бумагой, взвешивают, измельчают в фарфоровой ступке с битым нейтральным стеклом до получения однородной массы. Антигены для РСК готовят в виде 33 % суспензии (1 : 3), добавляя к полученному афтозному материалу двойное количество ФР. Взвесь экстрагируют при комнатной температуре и промораживают при минус 20 °С. После размораживания антиген очищают хлороформом: (10 % по объему) и центрифугируют 10 - 15 минут при 3000 - 5000 об/мин. Затем надосадок сливают и используют в качестве антигена.
РСК ставят в объеме 0,5 или 1,0 мл. Схема постановки реакции при типировании штаммов вируса ВВС и ВЭС представлена в таблице:
Компоненты
Сыворотки типов
Без сыворотки
ВВС, О-72
ВЕС, Т-75
ВЭС, С-72
ВЭС, А-48
Сыворотка в рабочем титре, мл
0,2
0,2
0,2
0,2
0
Испытуемый антиген
Цельный, мл
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
Разведение 1 : 2
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
Разведение 1 : 4
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
Комплемент, мл
0,2
0,2
0,2
0,2
0,2
ФР, мл
0
0
0
0
0,2
Водяная баня 20 минут при 37 °С
Гем. система, мл
0,4
0,4
0,4
0,4
0,4
Водяная баня 30 минут при 37 °С
Учет результатов
++++
-
-
-
-
Следовательно, данный антиген относится к типу ВБС, штамм О-72.
Примечание:
++++ - 100 % задержка гемолиза;
++ - 50 % задержка гемолиза;
+ - 25 % задержка гемолиза;
- - полный гемолиз.
Одновременно с постановкой главного опыта по определению типов вируса ставят контроль компонентов, участвующих в реакции. Схема постановки контроля к реакции на примере сыворотки ВБС штамм Т-75 представлена в таблице:
Разведения антигенов
Разведения сывороток в рабочих титрах
Без сыворотки
ВБС, Т-75
ВБС, 0-72
ВЭС, С-72
ВЭС, А-48
ВБС, Т-75
++++
-
-
-
-
ВБС, О-72
-
++++
-
-
-
ВЭС, С-72
-
-
++++
-
-
ВЭС, А-48
-
-
-
++++
-
Комплемент, 2 ЕД, мл
0,2
0,2
0,2
0,2
-
Гем. система, мл
0,4
0,4
0,4
0,4
-
Особые указания
Серии препаратов, не прошедшие контроль и с истекшим сроком годности, утилизируют автоклавированием при 1 атмосфере (120 - 130 °С) в течение 30 минут.
Условия хранения
В сухом темном месте при температуре от 2 до 8 °С. Срок годности - 24 месяца.
Производитель
Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия Адрес: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец.
Тел.: (4922) 26-06-14
Тел./факс: (4922) 26-38-77
E-mail: mail@arriah.ru
Подробнее о производителе
Продавец
