Описание препарата НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР (ИБК) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ ПРИ ТЕСТИРОВАНИИ СЫВОРОТОК В ОДНОМ РАЗВЕДЕНИИ

Название (рус.)

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР (ИБК) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ ПРИ ТЕСТИРОВАНИИ СЫВОРОТОК В ОДНОМ РАЗВЕДЕНИИ

Состав и форма выпуска

В состав набора входят - Иммуноспецифические компоненты: очищенный антиген вируса ИБК, адсорбированный в лунках планшета для ИФА 2 планшета; гипериммунная сыворотка крови кур к вирусу ИБК (положительный контроль), цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красного цвета, 0,2 мл - 1 флакон; нормальная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ИБК, цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красного цвета, 0,2 мл - 1 флакон; антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, лиофилизированный, сухая пористая масса белого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или концентрат раствора, прозрачная бесцветная жидкость, 3,0 мл - 1 флакон, рабочее разведение 1 : (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: концентрат буферного раствора для разведения испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата, бесцветная прозрачная жидкость, 32,5 мл - 1 флакон; концентрат раствора для межэтапной промывки, бесцветная прозрачная жидкость, 130 мл - 1 флакон; раствор субстрата АБТС (2,2'-азино-ди[3-этил]бензтиазолинсульфоновая кислота) с перекисью водорода - зеленоватая прозрачная жидкость, 25 мл - 1 флакон; концентрированный 5 кратный - 5 % раствор додецилсульфата натрия, бесцветная прозрачная жидкость, 5,0 мл - 1 флакон. Допускается образование осадка белого цвета при хранении в холодильнике. Набор рассчитан на анализ 92 проб сывороток крови кур на каждом планшете. Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения исследований по мере поступления биологического материала.

Фармакологические свойства

Сущность метода заключается в выявлении комплекса антиген антитело, образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунолероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации антител в исследуемом материале.

Показания

Для определения специфических гуморальных антител против вируса инфекционного бронхита кур (ИБК) в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФА) при исследовании в одном разведении.

Дозы и способ применения

Для постановки реакции используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки переменного объема до 0,02 мл до 0,2 мл и до 1,0 мл со сменными наконечниками, мерную лабораторную посуду, пробирки для разведения проб, дистиллированную или деионизированную воду, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, спектрофотометр (ридер) любой модели с фильтром на 405 - 410 нм для учетов результатов ИФА. Перед началом работы набор с компонентами выдерживают 30 минут при температуре 18 - 22 °С. Буфер для разведения проб, контрольных сывороток, антикуриного конъюгата. Содержимое флакона с концентратом буфера для разведения доводят дистиллированной водой до 250 мл. Рабочий раствор конъюгата. Содержимое флакона с лиофилизированным конъюгатом растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Для приготовления рабочего разведения конъюгата __ мл концентрата конъюгата доводят буфером для разведения до 10 мл (в расчете на 1 планшет). Содержимое флакона с лиофилизированной положительной контрольной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Содержимое флакона с лиофилизированной отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Промывочный буфер. Содержимое флакона с концентратом буфера для отмывки доводят дистиллированной или деионизированной водой до 1000 мл и тщательно перемешивают. . Концентрированный разводят в 5 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например для получения 12,5 мл к 2,5 мл концентрата добавляют 10 мл воды). Расход на 1 планшету - 12,5 мл. Внимание! Если при хранении 5 кратного раствора образовался осадок, его необходимо прогреть при комнатной температуре или при температуре 37 °С до полного растворения осадка. Разведение испытуемых и контрольных сывороток. Все испытуемые и контрольные пробы сывороток разводят 1 : 400 буфером для разведения, используя для каждой пробы новый наконечник. С этой целью к 0,0025 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл буфера для разведения и трижды пипетируют. Постановка реакции. Из комплекта набора берут планшет, сенсибилизированный антигеном вируса ИБК. В лунки А1 - А2 вносят по 100 мкл подготовленного отрицательного контроля. В лунки А3 - А4 вносят по 100 мкл подготовленного положительного контроля. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл испытуемых проб сыворотки крови. Планшет накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С, после чего лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают промывочным буфером (по 300 мкл на лунку). Затем жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С. Трижды повторяют процедуру промывания. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата, накрывают крышкой и выдерживают 10 минут при температуре 22 - 28 °С. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 100 мкл подготовленного . Учет результатов анализа проводят инструментальным способом сразу же после остановки реакции, используя спектрофотометр (ридер) с вертикальным лучом света при длине волны 405 - 410 нм. Оценка результатов реакции: Реакцию оценивают по отношению значений оптической плотности (ОП) испытуемой пробы (S) к значению оптической плотности положительного контроля (Р), что отражает относительное количество антител в исследуемых образцах. Среднее значение ОП отрицательных контролей должно быть не выше 0,150. Разница показателей между средним значением ОП положительного контроля и средним значением отрицательного контроля допустима в диапазоне 0,350 - 0,800. Если полученные значения выходят за пределы этих значений, результаты считаются недостоверными и реакцию повторяют. Расчет S/Р отношения: S/P = (Значение ОП испыт. сыв-ки - ср. значение ОП отрицательного контроля) / (Ср. значение полож. контроля - ср. значение отрицательного контроля) Полученные значения S/Р позволяют дифференцировать испытуемые сыворотки на положительные, отрицательные и сомнительные. Пробы сывороток со значениями S/Р ниже или равными 0,132 считаются отрицательными, если больше 0,221 - положительными. Расчет титра антител. Титр антител в исследуемых пробах сыворотки крови, разведенных 1 : 400, вычисляют по следующей формуле: Титр = апtilg (1,4727 (lg S/Р) + 3,8372). Интерпретация результатов - по результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества положительных проб к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к инфекционному бронхиту кур при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е., если в 80 и более процентах исследованных проб сывороток крови получены положительные результаты). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение антител у невакцинированной птицы свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ИБК. В таких случаях через 21 - 30 дней проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинических и патологоанатомических признаков ИБК является основанием для объявления в хозяйстве неблаго получия по данному заболеванию.

Особые указания

Флаконы и планшеты без этикеток, с нарушением целостности, изменением консистенции или цвета, наличием посторонних примесей подлежат выбраковке и утилизации. Работу с химическими компонентами набора следует проводить очень осторожно. При попадании их на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды под краном. Использованные планшеты обеззараживают 3 % раствором хлорной извести или другими сильными окислителями. Запрещается прием пищи и воды, курение в помещении, где проводятся работы с компонентами набора.

Условия хранения

В защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Не допускается замораживание компонентов. Срок годности набора - 12 месяцев.

Производитель

Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия Адрес: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец. Тел.: (4922) 26-06-14 Тел./факс: (4922) 26-38-77 E-mail: [email protected] Подробнее о производителе

Продавец

Название (рус.)

Состав и форма выпуска

Фармакологические свойства

Показания

Дозы и способ применения

Для постановки реакции используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки переменного объема до 0,02 мл до 0,2 мл и до 1,0 мл со сменными наконечниками, мерную лабораторную посуду, пробирки для разведения проб, дистиллированную или деионизированную воду, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, спектрофотометр (ридер) любой модели с фильтром на 405 - 410 нм для учетов результатов ИФА. Перед началом работы набор с компонентами выдерживают 30 минут при температуре 18 - 22 °С. Буфер для разведения проб, контрольных сывороток, антикуриного конъюгата. Содержимое флакона с концентратом буфера для разведения доводят дистиллированной водой до 250 мл. Рабочий раствор конъюгата. Содержимое флакона с лиофилизированным конъюгатом растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Для приготовления рабочего разведения конъюгата __ мл концентрата конъюгата доводят буфером для разведения до 10 мл (в расчете на 1 планшет). Содержимое флакона с лиофилизированной положительной контрольной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Содержимое флакона с лиофилизированной отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Промывочный буфер. Содержимое флакона с концентратом буфера для отмывки доводят дистиллированной или деионизированной водой до 1000 мл и тщательно перемешивают. . Концентрированный разводят в 5 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например для получения 12,5 мл к 2,5 мл концентрата добавляют 10 мл воды). Расход на 1 планшету - 12,5 мл. Внимание! Если при хранении 5 кратного раствора образовался осадок, его необходимо прогреть при комнатной температуре или при температуре 37 °С до полного растворения осадка. Разведение испытуемых и контрольных сывороток. Все испытуемые и контрольные пробы сывороток разводят 1 : 400 буфером для разведения, используя для каждой пробы новый наконечник. С этой целью к 0,0025 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл буфера для разведения и трижды пипетируют. Постановка реакции. Из комплекта набора берут планшет, сенсибилизированный антигеном вируса ИБК. В лунки А1 - А2 вносят по 100 мкл подготовленного отрицательного контроля. В лунки А3 - А4 вносят по 100 мкл подготовленного положительного контроля. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл испытуемых проб сыворотки крови. Планшет накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С, после чего лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают промывочным буфером (по 300 мкл на лунку). Затем жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С. Трижды повторяют процедуру промывания. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата, накрывают крышкой и выдерживают 10 минут при температуре 22 - 28 °С. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 100 мкл подготовленного . Учет результатов анализа проводят инструментальным способом сразу же после остановки реакции, используя спектрофотометр (ридер) с вертикальным лучом света при длине волны 405 - 410 нм. Оценка результатов реакции: Реакцию оценивают по отношению значений оптической плотности (ОП) испытуемой пробы (S) к значению оптической плотности положительного контроля (Р), что отражает относительное количество антител в исследуемых образцах. Среднее значение ОП отрицательных контролей должно быть не выше 0,150. Разница показателей между средним значением ОП положительного контроля и средним значением отрицательного контроля допустима в диапазоне 0,350 - 0,800. Если полученные значения выходят за пределы этих значений, результаты считаются недостоверными и реакцию повторяют. Расчет S/Р отношения:S/P = (Значение ОП испыт. сыв-ки - ср. значение ОП отрицательного контроля) / (Ср. значение полож. контроля - ср. значение отрицательного контроля)Полученные значения S/Р позволяют дифференцировать испытуемые сыворотки на положительные, отрицательные и сомнительные. Пробы сывороток со значениями S/Р ниже или равными 0,132 считаются отрицательными, если больше 0,221 - положительными. Расчет титра антител. Титр антител в исследуемых пробах сыворотки крови, разведенных 1 : 400, вычисляют по следующей формуле: Титр = апtilg (1,4727 (lg S/Р) + 3,8372). Интерпретация результатов - по результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества положительных проб к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к инфекционному бронхиту кур при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е., если в 80 и более процентах исследованных проб сывороток крови получены положительные результаты). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение антител у невакцинированной птицы свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ИБК. В таких случаях через 21 - 30 дней проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинических и патологоанатомических признаков ИБК является основанием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболеванию.

Особые указания

Условия хранения

Производитель

Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия Адрес: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец.Тел.: (4922) 26-06-14Тел./факс: (4922) 26-38-77E-mail: [email protected]