Ветеринарные препараты

Гомеопатические препараты

Название (рус.)

ВЕРАКОЛ ТАБЛЕТКИ

Состав и форма выпуска

Гомеопатический препарат Веракол содержит в качестве действующих веществ Podophyllum D8, Arsenicum album D10, Veratrum album D8, Colocynthis D8 и вспомогательные компоненты сахарную крупку и кальция стеарат. Препарат представляет собой таблетки белого цвета, расфасованные по 50 штук в полимерные банки.

Фармакологические свойства

Гомеопатическое средство Веракол, благодаря натуральным компонентам оказывает мягкое противовоспалительное действие, регулирует моторику желудочно-кишечного тракта. Веракол по степени воздействия на организм теплокровных животных относится к малоопасным веществам, в рекомендуемых дозах не оказывает местнораздражающего, резорбтивно-токсического, мутагенного и сенсибилизирующего действия.

Показания

Назначают с лечебной целью домашним животным при заболеваниях желудочно-кишечного тракта (гастроэнтерит, колибактериозный энтерит, гастрит, спастический колит, панкреатит), а также при интоксикациях и диспепсических явлениях, сопровождающихся рвотой, нарушением аппетита, расстройством дефекации.

Дозы и способ применения

Веракол в таблетках задают животным внутрь индивидуально при гастроэнтерите легкой и средней степени тяжести 2 раза в день, при тяжелом течении заболевания ― 3 раза в день. Разовая доза препарата на одно животное составляет: собакам крупных пород ― 3 таблетки, собакам средних пород ― 2 таблетки, собакам мелких пород, щенкам, кошкам и котятам ― 1 таблетка, хорькам и фреткам ― ½ – 1 таблетка, грызунам ― ¼ – ½ таблетки. Длительность курса лечения составляет 5 – 7 дней. При необходимости курс лечения повторяют. Применение Веракола не исключает использования других лекарственных средств.

Побочные действия

При правильном использовании и дозировке побочные явления, как правило, не наблюдаются.

Противопоказания

Повышенная индивидуальная чувствительность к препарату.

Особые указания

Особые меры предосторожности не предусмотрены.

Условия хранения

В сухом, защищенном от света и недоступном для детей и животных месте. Отдельно от пищевых продуктов и кормов при температуре от 0 до 25 ºС. Срок годности ― 5 лет.

Дополнительная информация

Препарат снят с производства.

Производитель

АлексАнн ООО, Россия Адрес: 141051, Московская обл., Мытищинский район, д. Еремино, ул. Лисицина, д. 117. Подробнее о производителе

Продавец

ВЕРАКОЛ РАСТВОР ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ

Название (рус.)

ВЕРАКОЛ РАСТВОР ДЛЯ ИНЪЕКЦИЙ

Состав и форма выпуска

Гомеопатический препарат Веракол содержит в качестве действующих веществ Podophyllum D8, Arsenicum album D10, Veratrum album D8, Colocynthis D8, а также вспомогательные компоненты: хлорид натрия и воду для инъекций. Препарат выпускают в форме стерильного прозрачного бесцветного раствора для инъекций, расфасованного по 10 мл и 100 мл в стеклянных флаконах.

Фармакологические свойства

Показания

Дозы и способ применения

Веракол раствор для инъекций вводят животным подкожно или внутримышечно. В острых случаях — 1 – 3 раза в день до стабилизации состояния. Разовая доза препарата на одно животное составляет: лошадям — 10 – 15 мл; крупному рогатому скоту — 5 – 10 мл; свиньям — 2,5 – 5 мл; козам, овцам, телятам, жеребятам, поросятам — 2 – 2,5 мл; собакам крупных и средних пород — 2 – 4 мл; собакам мелких пород, щенкам, кошкам и котятам — 0,5 – 2 мл; хорькам и фреткам — 0,5 мл и грызунам по 0,2 – 0,3 мл. Для каждого животного необходимо использовать отдельную стерильную иглу. Продолжительность терапевтического курса составляет 7 – 10 дней. При необходимости курс лечения повторяют. Применение Веракола не исключает использования других лекарственных средств.

Побочные действия

При правильном использовании и дозировке побочные явления, как правило, не наблюдаются.

Противопоказания

Повышенная индивидуальная чувствительность к препарату.

Особые указания

Продукцию от животных, которым применяли препарат, используют без ограничений. Препарат во флаконах с нарушенной целостностью, при помутнении или изменении цвета, наличии посторонних примесей, при истекшем сроке годности или нарушении условий хранения не пригоден к применению.

Условия хранения

В сухом, защищенном от света и недоступном для детей и животных месте. Отдельно от пищевых продуктов и кормов при температуре от 0 до 25 ºС. Срок годности — 3 года.

Производитель

Продавец

Диагностикумы

ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСА КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Название (рус.)

ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСА КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Состав и форма выпуска

Состоит из трех наборов и рассчитана на проведение 50 анализов. Наименование Количество Упаковка Набор 1 - для выделения РНК Раствор - 1 32 мл 2 флакона Раствор - 2 10 мл 1 флакон Раствор - 3 10 мл 1 флакон Сорбент 2 мл 1 пробирка Вода деионизованная 2 1 флакон Набор 2 - для выявления вируса КЧС методом ПЦР Фермент Tag-полимераза (5 ед/мкл) 25 мкл 1 пробирка Фермент MMLV ревертаза (200 ед/мкл) 8 мкл 1 пробирка Положительный контроль (вакцинный штамм вируса КЧС, лиофилизированный) на 2 мл раствора 2 флакона Праймеры для ПЦР-1 225 мкл 1 пробирка Праймеры для ПЦР-2 225 мкл 1 пробирка Буфер для ПЦР-1 760 мкл 1 пробирка Буфер для ПЦР-2 770 мкл 1 пробирка Масло 4 мл 1 флакон Набор 3 - для электрофореза Агароза 5 г 1 пакет Буфер для электрофореза (ТАЕ, 50 кратный) 20 мл 1 флакон Бромистый этидий (10 мг/мл) 150 мкл 1 пробирка Буфер для нанесения образца на гель 300 мкл 1 пробирка При точном соблюдении наставления по применению анализ занимает от 8 до 24 часов в зависимости от используемого оборудования. Компоненты наборов расфасовываются в полипропиленовые флаконы фирмы вместимостью 20 мл, микропробирки в пробирки фирмы Porex Dio Products Group (США) вместимостью 0,5 - 2 мл и 5 мл. На пробирки и флаконы наклеивают этикетку с указанием краткого названия компонента. Флаконы и пробирки с компонентами упаковывают в полиэтиленовые пакеты с наименованием каждого набора.

Фармакологические свойства

В основе ПЦР лежит многократное повторение циклов денатурации исследуемой ДНК при температуре 94 °C, гибридизации ДНК со специфическими праймерами при температуре 60 °C и синтеза с них комплементарных цепей ДНК с помощью термостабильной ДНК-полимеразы при температуре 72 °C. В результате амплификации концентрация синтезированного фрагмента в исследуемой пробе увеличивается в миллионы раз, что позволяет визуально учитывать результаты анализа с помощью электрофореза в агарозном теле. Поскольку геном вируса КЧС представлен молекулой РНК, полный анализ по его выявлению включает выделение суммарной РНК, получение ДНК и амплификацию специфического фрагмента ДНК в совмещенной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции, электрофорез в агарозном геле.

Показания

Для обнаружения вируса классической чумы свиней (КЧС) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). С помощью данной тест-системы вирус КЧС может быть обнаружен в инфицированных культурах клеток и патматериале от больных и павших животных (кровь, кусочки органов: селезенка, сердце, печень). Чувствительность реакции составляет 10³ ИД50. Рекомендована для определения вирулентного штамма вируса в крови животных через две недели после вакцинации.

Дозы и способ применения

Подготовка исследуемого материала. КРОВЬ: допускается однократное замораживание при температуре от минус 8 °С до минус 20 °C. Для исследования берут 200 мкл крови. ТКАНИ: гомогенизируют в физиологическом растворе или в растворе-1 для выделения РНК. Для анализа используют 200 мкл гомогената осветленного низкоскоростным центрифугированием. КОНТРОЛИ: Положительным контролем (K+) служит лиофилизированный вакцинный штамм вируса КЧС. Содержимое одного флакона растворить в 1 мл деионизованной воды, разделить на аликвоты по 200 мкл и хранить в замороженном состоянии. Неизрасходованный материал положительного контроля повторной заморозке не подлежит. Отрицательным контролем (K-) служит деионизованная вода. Выделение РНК из исследуемого биологического материала проводят с помощью Набора 1 - для выделения РНК. В каждой серии анализов параллельно ставят реакции с положительным и отрицательным контролем. Смеси для контрольных образцов готовят по той же прописи, что и для исследуемых образцов. На всех этапах анализа в первую очередь проводят манипуляции с отрицательным контролем, затем с исследуемыми образцами и в последнюю очередь с положительным контролем. Во избежание перекрестной контаминации до начала работы маркируют чистые пробирки объемом 1,5 мл и вносят в них по 600 мкл раствором-1. После этого приступают к работе с инфицированным материалом. Образцы исследуемого биологического материала (в объеме до 200 мкл) добавляют в подготовленные пробирки, содержащие 600 мкл раствора-1. Инкубируют 10 минут при комнатной температуре, периодически плавно перемешивая. Центрифугируют в настольной центрифуге типа 1 минуту при 13000 об/мин. Надосадочную жидкость переносят в чистые пробирки, а осадок отбрасывают. К надосадочной жидкости добавляют 40 мкл сорбента (сорбент перед использованием необходимо тщательно ресуспендировать), инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут, 1 - 2 раза перемешивая на смесителе типа . Центрифугируют 10 - 15 секунд на микроцентрифуге при 60000 - 13000 об/мин, надосадочную жидкость отбрасывают. К осадку добавляют 0,1 мл раствор-2, суспендируют и осаждают сорбент центрифугированием в течение 15 секунд, надосадочную жидкость отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. К осадку добавляют 0,1 мл раствора-3, перемешивают, центрифугируют 15 секунд, надосадочную жидкость отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. Осадок подсушивают в течение 5 - 10 минут при 56 °C в пробирке с открытой крышкой. К осадку добавляют 30 мкл деионизованной воды для элюции РНК с сорбента, перемешивают и инкубируют 10 - 15 минут при 56 °C в закрытых пробирках. Центрифугируют в течение 0,5 минут при 13000 об/мин. Отобранную надосадочную жидкость используют для проведения ПЦР. На всех стадиях обработки биоматериала удаление супернатанта производить одноразовыми пластиковыми наконечниками при помощи вакуумного насоса в колбу-ловушку с дезинфицирующим раствором (3 % хлорамин или 5 % перекись водорода и т. п.). Реакция совмещенной обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции. Для выполнения стадий используют Набор 2 - для выявления вируса КЧС методом ПЦР. В отдельной пробирке готовят общую реакционную смесь на N образцов, в число которых входят положительный и отрицательный контроли. Реактивы вносят в последовательности, приведенной в таблице. Работу желательно проводить на холоде. Реактив Количество на 1 пробу (мкл) Количество на N проб Буфер для ПЦР-2 15,125 15,125 х (N+1) Праймеры для ПЦР-2 4,5 4,5 х (N+1) Tag-полимераза 0,25 0,25 х (N+1) Фермент ММДМ ревертаза 0,125 0,125 х (N+1) Ферменты добавляют в последнюю очередь. Смесь перемешивают, избегая образования пены, и немедленно раскапывают по 20 мкл в предварительно промаркированные пробирки, затем в них вносят по 2 - 3 капли масла (примерно 40 мкл) и по 5 мкл РНК соответствующих анализируемых или контрольных образцов, затем пробы помещают в амплификатор со следующим температурным режимом: 50 °C - 45 минут 94 °C - 5 минут 1 цикл 94 °C - 0,5 минут 60 °C - 0,5 минут 25 циклов отдельной пробирке готовят общую реакционную смесь на N образцов, в число которых входят положительный и отрицательный контроли. Реактивы вносят в последовательности, приведенной в таблице. Работу желательно проводить на холоде. Реактив Количество на 1 пробу (мкл) Количество на N проб Буфер для ПЦР-2 15,25 15,25 х (N+1) Праймеры для ПЦР-2 4,5 4,5 х (N+1) Tag-полимераза 0,25 0,25 х (N+1) вносят фермент Tag-полимеразу. Смесь перемешивают и разливают по 20 мкл в предварительно промаркированные пробирки для ПЦР. В каждую пробирку добавляют по 2 - 3 капли масла (примерно, 40 мкл). В последнюю очередь в соответствующие пробирки вносят по 5 мкл продукта реакции ПЦР-1, перемешивают пипетированием (4 - 5 раза), затем пробы помещают в амплификатор со следующим температурным режимом: 94 °C - 0,5 минут 60 °C - 0,5 минут 25 циклов Продукты ПЦР-2 анализируют методом электрофореза в агарозном геле с помощью Набора 3 - для электрофореза. Приготовление буфера для электрофореза. Для приготовления 1 л однократного буфера для электрофореза к 20 мл 50 х ТАЕ буфера добавляют 980 мл дистиллированной воды и 40 мкл раствора бромистого этидия. Примечание: Буфер можно приготовить самостоятельно по следующей прописи: навеску 4,04 г основного триса растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 1,14 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл 0,5 М раствора ЭДТА pH 8 и доводят объем буфера до 1000 мл дистиллированной воды. После растворения компонентов добавляют 40 мкл раствора бромистого этидия. Приготовление агарозного геля. В термостойкой посуде готовят необходимый объем 2 % суспензии агарозы на однократном буфере для электрофореза и нагревают на электроплите или в микроволновой печи до полного растворения агарозы. Расплавленную агарозу охлаждают до 45 °C, постоянно перемешивая, размешивают, заливают в специальную форму с гребенкой и дают затвердеть. Форму с образовавшимся агарозным гелем переносят в аппарат для горизонтального электрофореза погружают в буфер и осторожно вынимают гребенку. Оставшуюся часть затвердевшей агарозы можно повторно расплавить и использовать для приготовления геля. Электрофорез продуктов амплификации. В пробирки с исследуемым образцами после завершения ПЦР-2 добавляют по 3 мкл буфера для нанесения образца, перемешивают пипетированием (4 - 5 раз), отбирают по 10 мкл окрашенной водной фазы и вносят в лунки агарозного геля, образовавшихся от зубцов гребенки. Электрофорез проводят при напряжении 8 вольт/см длины геля до тех пор, пока краситель пройдет от старта не менее половины геля (примерно 30 - 60). Направление движения образцов в геле от к . Учет результат электрофореза - Результаты электрофореза учитывают, просматривая гель в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе . Амплифицированные фрагменты ДНК выявляются в виде светящихся красноватых полос. Положительными считают пробы, полосы в которых располагаются в геле точно на таком же расстоянии от старта, что и полоса положительного контроля (фрагмент длиной 172 п.н.). В отрицательном контроле не должно выявляться никаких полос. Исследуемые пробы считают отрицательными, если в них не выявлено никаких полос или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т. е. располагаются на другом расстоянии от страта). Присутствие в отрицательном контроле окрашенных фрагментов на уровне полос положительного контроля свидетельствует о перекрестной контаминации в процессе анализа. Результаты аннулируются. Анализ необходимо провести заново. Для документирования полученных результатов используют фотопленку и аппарат типа с оранжевым светофильтром, либо другие фото- и видеосистемы.

Особые указания

Бромистый этидий является мутагеном, проникающим через кожу. При работе с ним использовать резиновые перчатки. Бромистый этидий разлагается на свету и при нагревании. Содержащие его растворы хранят в темном месте. При длительном хранении или многократном нагревании. Содержащие его растворы хранят в темном месте. При длительном хранении или многократном нагревании в них следует внести свежую порцию бромистого (5 мкл буфера) этидия перед употреблением. Ультрафиолет вызывает ожоги слизистой оболочки глаз. При просмотре гелей пользоваться защитным экраном или очками. Строгое соблюдение условий хранения компонентов тест-системы. Однократное использование пластикой посуды. Ранее использованные и мытые наконечники и пробирки использовать нельзя. При составлении смеси для амплификации вначале готовить отрицательный контроль, а последним - положительный контроль. Посуда для отбора образцов биоматериала должна быть одноразовой или тщательно обработана хромпиком, отмыта, простерилизована.

Условия хранения

Набор 1 - при температуре от 2 до 6 °C, набор 2 - при температуре от минус 18 до минус 20 °C, набор 3 - при температуре от 2 до 6 °C. Транспортирование проводится при температуре от 0 °C до 2 °C. Срок годности - 12 месяцев.

Производитель

НАРВАК НПО ЗАО, Россия Адрес: 123098, г. Москва, ул. Гамалеи, д. 16. Тел./факс: (495) 916-10-67, 916-17-05, 916-11-59, 190-75-61, 190-28-72, 190-30-54, 787-69-32, 787-69-33 Подробнее о производителе

Продавец

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ ЛЕПТОСПИР МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Название (рус.)

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ПАТОГЕННЫХ ЛЕПТОСПИР МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Состав и форма выпуска

Состоит из 3 наборов и рассчитана на проведение 50 диагностических исследований. Наименование Количество Упаковка Набор 1 - для выделения РНК Раствор-1 10 мл 1 флакона Раствор-2 32 мл 1 флакон Раствор-3 10 мл 1 флакон Сорбент 1 мл 1 пробирка Вода деионизованная 2 мл 1 флакон Набор 2 - определения ДНК патогенных лептоспир методом ПЦР Праймеры для ПЦР-1 225 мкл 1 пробирка Праймеры для ПЦР-2 225 мкл 1 пробирка Положительный контроль (инактивированная культура лептоспир) 0,5 мкл 1 пробирка Положительный контроль (ДНК лептоспир) 25 мкл 1 пробирка Буфер для ПЦР 1,6 мл 1 пробирка Фермент Tag-полимераза (5 ед/мкл) 25 мкл 1 пробирка Масло 4 мл 1 флакон Набор 3 - для электрофореза Агароза 5 г 1 пакет Буфер для электрофореза (TAE, 50-кратный) 20 мл 1 флакон Бромистый этидий (10 мг/мл) 150 мкл 1 пробирка Буфер для нанесения образца на гель 300 мкл 1 пробирка Время проведения анализа при точном соблюдении наставления по применению составляет 8 - 16 ч в зависимости от используемого оборудования. Компоненты наборов расфасовывают в полипропиленовые флаконы фирмы вместимостью 20 мл, микропробирки и пробирки фирмы Porex Bio Products Group (США) вместимостью 0,5 - 2 мл и 5 мл. На пробирки и флаконы наклеивают этикетку с указанием краткого названия компонента. Флаконы и пробирки с компонентами упаковывают в полиэтиленовые пакеты с наименованием каждого набора.

Фармакологические свойства

Идентификация лептоспир проводится с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР). В основе метода лежит многократное цикличное повторение трех процессов: тепловая денатурация ДНК в исследуемой пробе при 94 °C; гибридизация () исследуемой ДНК со специфическими олигонуклеотидными зондами (праймерами) при 55 °C; синтез комплементарных цепей ДНК с помощью термостабильной ДНК-полимеразы при 72 °C. Для детекции лептоспир применяется двухступенчатая (т. н. ) модификация метода ПЦР с использованием внутренних и внешних праймеров. Для идентификации ДНК лептоспир используются праймеры для ПЦР-1 (внешние) и для ПЦР-2 (внутренние). Праймеры предназначены для определения 15 серовариантов Leptospira interrogans. В результате проведения N циклов амплификации концентрация синтезированного фрагмента в исследуемой пробе увеличивается в 2 раза (например, в миллион раз после 20 циклов), что позволяет визуально учитывать результаты анализа с помощью электрофореза ДНК в агарозном геле.

Показания

Предназначена для выявления 15 наиболее распространенных серогрупп Leptospira interogans в образцах крови и мочи животных (прижизненно), в патматериалах от умерших или вынужденно убитых животных (кровь, органы) и в культуральных образцах. Включает 50 диагностических исследований

Дозы и способ применения

Отбор проб и их доставка в лабораторию производится согласно ГОСТ 25386-91 . Для каждого образца используется строго индивидуальный стерильный инструмент и емкость. Подготовка исследуемого материала. КРОВЬ: Используют без предварительной подготовки. Для анализа достаточно 200 мкл крови. МОЧА: 5 - 10 мл центрифугируют при 5000 об/мин. в течение 10 минут, надосадочную жидкость осторожно отбирают и отбрасывают так, чтоб над осадком осталось примерно 200 мкл жидкости. Осадок суспендируют в оставшемся над осадком объеме жидкости и переносят в полипропиленовую пробирку на 1,5 мл. ОРГАНЫ: кусочки паренхиматозных органов, лимфоузлов (10 - 20 мг) измельчают ножницами и растирают до гомогенного состояния в физиологическом растворе. Для анализа используют 200 мкл полученной неосветленной суспензии. Выделение ДНК из исследуемого биологического материала проводят с помощью Набора 1 - для выделения ДНК. Во избежание перекрестной контаминации до начала работы маркируют чистые пробирки объемом 1,5 мл и вносят в них по 200 мкл раствора-1. После этого приступают к работе с инфицированным материалом. В подготовительные пробирки с раствором-1 (200 мкл) вносят по 200 мкл исследуемого биологического материала, перемешивают на смесителе типа Vortex и инкубируют 20 минут при температуре 95 °C в воздушном или водяном термостате. Пробы центрифугируют в настольной центрифуге типа в течение 2 минут при 10000 - 13000 об/мин. Надосадочную жидкость отбирают для проведения анализа, а осадок отбрасывают. Примечание: чтобы избежать самопроизвольного открывания пробирок при нагревании, следует придавить их грузом или использовать специальные пробирки с защелкой. К надосадочной жидкости добавляют 0,6 мл раствора-2 и 20 мкл сорбента (сорбент перед использованием необходимо тщательно ресуспендировать). Пробы тщательно перемешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 15 минут. Во время инкубации необходимо 3 - 5 раз встряхнуть пробирки, чтобы предотвратить выпадение сорбента на дно. Затем пробы центрифугируют 10 - 15 секунд при 10000 - 13000 об/мин для осаждения сорбента, надосадочную жидкость отбрасывают. К осадку добавляют 100 мкл раствора-3, перемешивают на смесителе, центрифугируют в течение 15 секунд. Супернатант отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. К осадку добавляют 100 мкл раствора-4, перемешивают, центрифугируют в течение 15 секунд. Надосадочную жидкость отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. Осадок подсушивают при 56 °C в течение 10 - 15 минут в пробирке с открытой крышкой. К осадку добавляют 30 мкл деионизованной воды для элюции ДНК с сорбента, перемешивают и инкубируют 10 - 15 минут при 56 °C в закрытых пробирках. Центрифугируют в течение 1 минуты при 13000 об/мин. Отобранную надосадочную жидкость используют для проведения ПЦР. На всех стадиях обработки биоматериала удаление супернатанта производить одноразовыми пластиковыми наконечниками при помощи вакуумного насоса в колбу-ловушку с дезинфицирующим раствором (3 % хлорамин или 5 % перекись водорода и т. ж.). Работа с контрольными образцами. В каждой серии анализов на стадиях параллельно проводят реакции с положительным и отрицательным контролями, при этом в первую очередь осуществляют все манипуляции с отрицательными контролями, затем с исследуемыми пробам и в последнюю очередь - с положительными контролями. Положительным контролем выделения ДНК служит инактивированная культура лептоспир. Для выделения ДНК достаточно 50 мкл культуры. В качестве отрицательного контроля выделения ДНК используют деионизованную воду или питательную среду для культивирования лептоспир. Выделенную из инактивированной культуры ДНК используют в реакции амплификации наряду с другими пробами. Неизрасходованную часть выделенной ДНК лептоспир можно заморозить и в дальнейшем использовать в качестве положительного контроля ПЦР. Положительным контролем ПЦР служит ДНК лептоспир из Набора 2 для определения ДНК патогенных лептоспир методом ПЦР. При постановке ПЦР берут 5 мкл контрольной ДНК. В качестве отрицательного контроля ПЦР используют деионизованную воду. Полимеразная цепная реакция проводится с помощью Набора 2 для определения ДНК патогенных лептоспир методом ПЦР. Проведение первого раунда полимеразной цепной реакции (ПЦР-1): В отдельной пробирке готовят общую реакционную смесь на N образцов, в число которых входят положительный и отрицательный контроли. Реактивы вносят в последовательности, приведенной в таблице. Работу желательно проводить на холоде. Реактив Количество на 1 пробу (мкл) Количество на N проб Буфер для ПЦР-2 15,25 15,25 х (N+1) Праймеры для ПЦР-2 4,5 4,5 х (N+1) Tag-полимераза 0,25 0,25 х (N+1) Реактивы смешивают в последовательности, как они перечислены в таблице. Последним добавляют фермент Tag-полимеразу. Смесь перемешивают и разливают по 20 мкл в предварительно промаркированные пробирки для ПЦР. В каждую пробирку вносят по 5 мкл исследуемой ДНК и осторожно, не касаясь стенок пробирок, наносят по 2 - 3 капли масла (примерно 40 мкл), затем пробы помещают в амплификатор со следующим температурным режимом: 94 °C - 0,5 минут 55 °C - 0,5 минут 25 циклов 72 °C - 0,5 минут Проведение второго раунда ПЦР (ПЦР-2). Все процедуры проводят так же, как описано выше, со следующими изменениями: используют праймеры для ПЦР-2 (вместо ПЦР-2); в качестве матрицы используют 5 мкл продукта реакции ПЦР-1. Учет результатов амплификации - Продукты ПЦР-2 анализируют методом электрофореза в агарозном геле с помощью Набора 3 для электрофореза. Приготовление буфера для электрофореза. Для приготовления 1 л однократного буфера для электрофореза к 20 мкл 50 х TAE буфера добавляют 980 мл дистиллированной воды и 40 мкл раствора бромистого этидия. Примечание: Буфер можно приготовить самостоятельно по следующей прописи: навеску 4,04 г основного триса растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 1,14 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл 0,5 М раствора ЭДТА pH 8 и доводят объем буфера до 1000 мл дистиллированной водой. После растворения компонентов добавляют 40 мкл раствора бромистого эдития. Приготовление агарозного геля. В термостойкой посуде готовят необходимый объем 2 % суспензии агарозы на однократном буфере для электрофореза и нагревают на электроплите или в микроволновой печи до полного растворения агарозы. Расплавленную агарозу охлаждают до 45 °C, постоянно перемешивая, размешивают, заливают в специальную форму с гребенкой и дают затвердеть. Форму с образовавшимся агарозным гелем переносят в аппарат для горизонтального электрофореза, погружают в буфер и осторожно вынимают гребенку. Оставшуюся часть затвердевшей агарозы можно повторно расплавить и использовать для приготовления геля. Электрофорез продуктов амплификации. В пробирки с исследуемыми образцами после завершения ПЦР-2 добавляют по 3 мкл буфера для нанесения образа, перемешивают пипетированием (4 - 5 раз), отбирают по 10 мкл окрашенной водной фазы и вносят в лунки агарозного геля, образовавшиеся от зубцов гребенки. Электрофорез проводят при напряжении 8 вольт/см длины геля до тех пор, пока краситель пройдет от старта не менее половины геля (примерно 30 - 60 минут). Направление движения образцов в геле от к . Учет результатов электрофореза. Результаты электрофореза учитывают, просматривая гель в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе . Амплифицированные фрагменты ДНК выявляются в виде светящихся красноватых полос. Положительными считают пробы, полосы в которых располагаются в геле точно на таком же расстоянии от старта, что и полоса положительного контроля (фрагмент длиной 180 п. н.). В отрицательном контроле не должно выявляться никаких полос. Исследуемые пробы считают отрицательными, если в них не выявлено никаких полос или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т. е. располагаются на другом на другом расстоянии от старта). Присутствие в отрицательном контроле окрашенных фрагментов на уровне полос положительного контроля свидетельствует о перекрестной контаминации в процессе анализа. Результаты аннулируются. Анализ необходимо провести заново. Для документирования полученных результатов используют фотопленку и аппарат типа с оранжевым светофильтром, либо другие фото- и видеосистемы.

Особые указания

Положительными считают пробы, полосы в которых располагаются в геле точно на таком же расстоянии от старта, что и полоса положительного контроля (фрагмент длиной 180 п. н.). В отрицательном контроле не должно выявляться никаких полос. Исследуемые пробы считают отрицательными, если в них не выявлено никаких полос или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т. е. располагаются на другом на другом расстоянии от старта). Присутствие в отрицательном контроле окрашенных фрагментов на уровне полос положительного контроля свидетельствует о перекрестной контаминации в процессе анализа. Результаты аннулируются. Анализ необходимо провести заново. Для документирования полученных результатов используют фотопленку и аппарат типа с оранжевым светофильтром, либо другие фото- и видеосистемы.

Условия хранения

Производитель

Продавец

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСА ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Название (рус.)

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСА ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Состав и форма выпуска

Состоит из трех наборов и рассчитана на проведение 50 анализов. Наименование Количество Упаковка Набор 1 - для выделения РНК Раствор-1 32 мл 2 флакона Раствор-2 10 мл 1 флакон Раствор-3 10 мл 1 флакон Сорбент 2 мл 1 пробирка Вода деионизованная 2 мл 1 флакон Набор 2 - для выявления вируса ЧП методом ПЦР Фермент Tag-полимераза (5 ед/мкл) 25 мкл 1 пробирка Фермент MMLV ревертаза (200 ед/мкл) 8 мкл 1 пробирка Положительный контроль (вакцинный штамм вируса ЧП, лиофилизированный) на 2 мл раствора 2 флакона Праймеры для ПЦР-1 225 мкл 1 пробирка Праймеры для ПЦР-2 225 мкл 1 пробирка Буфер для ПЦР-1 760 мкл 1 пробирка Буфер для ПЦР-2 770 мкл 1 пробирка Масло 4 мл 1 флакон Набор - 3 для электрофореза Агароза 5 г 1 пакет Буфер для электрофореза (TAE, 50-кратный) 20 мл 1 флакон Бромистый этидий (10 мг/мл) 150 мкл 1 пробирка Буфер для нанесения образца на гель 300 мкл 1 пробирка При точном соблюдении наставления по применению анализ занимает от 8 до 24 часов в зависимости от используемого оборудования. Компоненты наборов расфасовывают в полипропиленовые флаконы фирмы вместимостью 20 мл, микропробирки и пробирки фирмы Porex Bio Products Group (США) вместимостью 0,5 - 2 мл и 5 мл. На пробирки и флаконы наклеивают этикету с указанием краткого названия компонента. Флаконы и пробирки с компонентами упаковывают в полиэтиленовые пакеты с наименованием каждого набора.

Фармакологические свойства

В основе лежит многократное повторение циклов денатурации исследуемой ДНК при температуре 94 °C, гибридизации ДНК со специфическими праймерами при температуре 53 °C и синтеза с них комплементарных цепей ДНК с помощью термостабильной ДНК-полимеразы при температуре 72 °C.. Поскольку геном вируса ЧП представлен молекулой РНК, полный анализ по его выявлению включает выделение суммарной РНК, получение кДНК и амплификацию специфического фрагмента ДНК в совмещенной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции. В результате амплификации концентрация синтезированного фрагмента в исследуемой пробе увеличивается в миллионы раз, что позволяет визуально учитывать результаты анализа с помощью электрофореза в агарозном геле.

Показания

Для обнаружения вируса чумы плотоядных методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в крови, носовых и конъюнктивальных смывах от больных животных, в инфицированных культурах клеток и патматериале от умерших или вынужденно убитых животных (селезенка, сердце, печень).

Дозы и способ применения

Подготовка исследуемого материала. Подготовка исследуемых образцов: НОСОВЫЕ И КОНЪЮНКТИВАЛЬНЫЕ СМЫВЫ: Ватный тампон (или одноразовый шпатель), содержащий глазной смыв, переносят в пробирку с 5 мл физиологического раствора. После тщательного перемешивания тампон отжимают и удаляют. Для анализа используют 200 мкл полученной суспензии. КРОВЬ: допускается однократное замораживание при температуре от минус 8 °C до минус 20 °C. Для исследования берут 200 мкл крови. ТКАНИ: Ткани гомогенизируют в физиологическом растворе или в растворе-1 для выделения РНК. Для анализа используют 200 мкл гомогената. КОНТРОЛИ. При постановке каждой серии анализов включают положительный (K+) и отрицательный (K-) контроли. Положительным контролем выделения служит лиофилизированная вакцина (K+). Содержимое одного флакона растворить в 1 мл деионизованной воды, разделить на аликвоты по 200 мкл и хранить в замороженном состоянии (не выше минус 15 °C). Размораживать аликвоту непосредственно перед использованием. Неизрасходованный материал положительного контроля повторной заморозке не подлежит. Для исследования берут 200 мкл. Отрицательным контролем (K-) служит деионизованная вода. Выделение РНК из исследуемого биологического материала проводят с помощью Набора 1 для выделения РНК. В каждой серии анализов параллельно ставят реакции с положительным и отрицательным контролями. Смеси для контрольных образцов готовят по той же прописи, что и для исследуемых образцов. На всех этапах анализа в первую очередь проводят манипуляции с отрицательным контролем, затем с исследуемыми образцами и в последнюю очередь с положительным контролем. Во избежании перекрестной контаминации до начала работы маркируют чистые пробирки объемом 1,5 мл и вносят в них по 600 мкл раствора-1. После этого приступают к работе с инфицированным материалом. Образцы исследуемого биологического материала (в объеме до 200 мкл) добавляют в подготовленные пробирки, содержащие мкл раствора-1. Инкубируют 10 минут при комнатной температуре, периодически плавно перемешивая. Центрифугируют в настольной центрифуге типа 1 минуту при 13000 об/мин. Надосадочную жидкость переносят в чистые пробирки, а осадок отбрасывают. К надосадочной жидкости добавляют 40 мкл сорбента (сорбент перед использованием необходимо тщательно ресуспендировать), инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут, 1 - 2 раза перемешивая на смесители типа . Центрифугируют 10 - 15 секунд на микроцентрифуге при 6000 - 13000 об/мин, надосадочную жидкость отбрасывают. К осадку добавляют 0,1 мл раствора-2, суспендируют и осаждают сорбент центрифугированием в течение 15 секунд, надосадочную жидкость отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. К осадку добавляют 0,1 мл раствора-3, перемешивают, центрифугируют 15 секунд, надосадочную жидкость отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. Осадок подсушивают в течение 5 - 10 минут при 56 °C в пробирке с отрытой крышкой. К осадку добавляют 30 мкл деионизованной воды для элюции РНК с сорбента, перемешивают и инкубируют 10 - 15 минут при 56 °C в закрытых пробирках. Центрифугируют в течение 0,5 минут при 13000 об/мин. Отобранную надосадочную жидкость используют для проведения ПЦР. На всех стадиях обработки биоматериала удаление супернатанта производить одноразовыми пластиковыми наконечниками при помощи вакуумного насоса в колбу-ловушку с дезинфицирующим раствором (3 % хлорамин или 5 % перекись водорода и т. п.). Реакция совмещенной обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ПЦР-1). Для выполнения вышеописанных стадий используют Набор 2 для выявления вируса ЧП методом ПЦР. В отдельной пробирке готовят общую реакционную смесь на N образцов, в число которых входят положительный и отрицательный контроли. Реактивы вносят в последовательности, приведенной в таблице. Работу желательно проводить на холоде. Реактив Количество на 1 пробу (мкл) Количество на N проб Буфер для ПЦР-1 15,125 15,125 х (N+1) Праймеры для ПЦР-1 4,5 4,5 х (N+1) Фермент Tag-полимераза 0,25 0,25 х (N+1) Фермент MMLV 0,125 0,125 х (N+1) Ферменты добавляют в последнюю очередь. Смесь перемешивают, избегая образования пены, и немедленно раскапывают по 20 мкл в предварительно промаркированные пробирки, в каждую пробирку добавляют по 2 - 3 капли масла (примерно 40 мкл). Затем в них вносят по 5 мкл РНК соответствующих анализируемых или контрольных образцов, перемешивают (4 - 5 раз), затем пробы помещают в амплификатор со следующим температурным режимом: 50 ° C - 45 минут 94 °C - 5 минут 1 цикл 94 °C - 0,5 минут 53 °С - 0,5 минут 25 циклов 72 °C - 0,5 минут Полимеразная цепная реакция. Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР-2). В отдельной пробирке готовят общую реакционную смесь на N образцов, в число которых входят положительный и отрицательный контроли. Реактивы вносят в последовательности, приведенной в таблице. Работу желательно проводить на холоде. Реактив Количество на 1 пробу (мкл) Количество на N проб Буфер для ПЦР-2 15,25 15,25 х (N+1) Праймеры для ПЦР-2 4,5 4,5 х (N+1) Tag-полимераза 0,25 0,25 х (N+1) Реактивы смешивают в последовательности, как они перечислены в таблицы. Последним вносят фермент Tag-полимеразу. Смесь перемешивают и разливают по 20 мкл в предварительно промаркированные пробирки для ПЦР. В каждую пробирку добавляют по 2 - 3 капли масла (примерно 40 мкл). В последнюю очередь в соответствующие пробирки вносят по 5 мкл продукта реакции ПЦР0-1, перемешивают пипетированием (4 - 5 раз), затем пробы помещают в амплификатор со следующим температурным режимом: 94 °C - 0,5 минут 53 °C - 0,5 минут 25 циклов 72 °С - 0,5 минут Продукты ПЦР-2 анализируют методом электрофореза в агарозном геле с помощью Набора 3 для электрофореза. Приготовление буфера для электрофореза. Для приготовления 1 л однократного буфера для электрофореза к 20 мл 50 х TAE буфера добавляют 980 мл дистиллированной воды и 40 мкл раствора бромистого этидия. Примечание: Буфер можно приготовить самостоятельно по следующей прописи: навеску 4,04 г основного триса растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 1,14 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл 0,5 М раствора ЭДТА pH 8 и доводят объем буфера до 1000 мл дистиллированной водой. После растворения компонентов добавляют 40 мкл раствора бромистого этидия. Приготовление агарозного геля. В термостойкой посуде готовят необходимый объем 2 % суспензии агарозы на однократном буфере для электрофореза и нагревают на электроплите или в микроволновой печи до полного растворения агарозы. Расплавленную агарозу охлаждают до 45 °C, постоянно перемешивают, размешивают, заливают в специальную форму с гребенкой и дают затвердить. Форму с образовавшимся агарозным гелем переносят в аппарат для горизонтального электрофореза, погружают в буфер и осторожно вынимают гребенку. Оставшуюся часть затвердевшей агарозы можно повторно расплавить и использовать для приготовления геля. Электрофорез продуктов амплификации. В пробирки с исследуемыми образцами после завершения ПЦР-2 добавляют по 3 мкл буфера для нанесения образца, перемешивают пипетированием (4 - 5 раз), отбирают по 10 мкл окрашенной водной фазы и вносят в лунки агарозного геля, образовавшиеся от зубцов гребенки. Электрофорез проводят при напряжении 8 вольт/см длины геля до тех пор, пока краситель пройдет от старта не менее половины геля (примерно 30 - 60 минут). Направление движения образцов в геле от к . Учет результатов электрофореза. Результаты электрофореза учитывают, просматривая гель в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе . Амплифицированные фрагменты ДНК выявляются в виде светя щихся красноватых полос. Положительными считают пробы, полосы в которых располагаются в геле точно на таком же расстоянии от страта, что и полоса положительного контроля (фрагмент длиной 273 п. н.). В отрицательном контроле не должно выявляться никаких полос. Исследуемые пробы считают отрицательными, если в них не выявлено никаких полос. или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т. е. располагаются на другом расстоянии от страта). Присутствие в отрицательном контроле окрашенных фрагментов на уровне полос положительного контроля свидетельствует о перекрестной контаминации в процессе анализа. Результаты аннулируются. Анализ необходимо провести заново. Для документирования полученных результатов используют фотопленку и аппарат типа с оранжевым светофильтром, либо другие фото- и видеосистемы.

Особые указания

Бромистый этидий является мутагеном, проникающим через кожу. При работе с ним использовать резиновые перчатки. Бромистый этидий разлагается на свету и при нагревании. Содержащие его растворы хранят в темном месте. При длительном хранении или многократном нагревании в них следует внести свежую порцию (5 мкл на 100 мл буфера) бромистого этидия перед употреблением. Ультрафиолет вызывает ожоги слизистой оболочки глаз. При просмотре гелей пользоваться защитным экраном или очками. Строгое соблюдение условий хранения компонентов. Однократное использование пластиковой посуды. Ранее использованные и мытые наконечники и пробирки использовать нельзя. При составлении смеси для амплификации вначале готовить отрицательный контроль, а последним - положительный контроль. Посуда для отбора образцов биоматериала должна быть одноразовой или тщательно обработана хромпиком, отмыта, простерилизована.

Условия хранения

Производитель

Продавец

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСА ТРАНСМИССИВНОГО ГАСТРОЭНТЕРИТА (ТГС) И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ ЕГО ОТ РЕСПИРАТОРНОГО КОРОНАВИРУСА СВИНЕЙ (РКВС) МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Название (рус.)

Состав и форма выпуска

Состоит из следующих наборов: № Название набора и количество анализов 1 Набор для выявления РНК вируса ТГС и РКВС методом ПЦР (50 анализов) 2 Набор для выделения РНК (50 образцов) 3 Набор для проведения электрофореза (5 гелей по 10 образцов) Набор для выявления РНК вируса ТГС и РКВС методом ПЦР (состоит из 8 компонентов): Наименование Количество Упаковка Термостабильная ДНК-полимераза 25 мкл 1 пробирка Мезофильная ревертаза 7 мкл 1 пробирка Инактивированная культура вируса ТГС (положительный контроль) 200 мл 1 пробирка Праймеры ПЦР-1 с нуклеозидтрифатами (dNTPs 2,5 mM каждого): 225 мкл 1 пробирка Праймеры ПЦР-2 с нуклеозидтрифатами (dNTPs 2,5 mM каждого): 225 мкл 1 пробирка Реакционный буфер для ОТ-ПЦР 1600 мкл 1 пробирка Деионизованная вода (отрицательный контроль) 1,5 мл 1 флакон Вазелиновое масло 4 мл 1 флакон Набор для выделения РНК (состоит из 5 компонентов): Наименование Количество Упаковка Раствор № 1 55 мл 1 флакон Раствор № 2 10 мл 1 флакон Раствор № 3 10 мл 1 флакон Сорбент 2 мл 1 пробирка Набор для проведения электрофореза (состоит из 4 компонентов на 5 гелей по 10 образцов): Наименование Количество Упаковка Агароза 5 г 1 флакон 50-кратный TAE буфер для электрофореза 20 мл 1 флакон Раствор бромистого этидия (10 мг/мл) 150 мкл 1 пробирка Буфер для нанесения образца 300 мкл 1 пробирка При точном соблюдении наставления по применению анализ занимает от 8 до 16 часов (в зависимости от условий выделения). Флаконы и пробирки упаковывают в полиэтиленовые пакеты с наименованием тест-системы и каждого набора.

Фармакологические свойства

Обнаружение РНК вируса трансмиссивного гастроэнтерита (ТГС) и дифференциация ее от РНК респираторного коронавируса свиней (РКВС) проводится с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР). Перед проведением ПЦР необходимо провести реакцию обратной транскрипции (РНК преобразуется в ДНК). В основе метода ПЦР лежит многократное цикличное повторение трех процессов: денатурации ДНК; гибридизации () исследуемой ДНК со специфическими олигонуклеотидными зондами (праймерами); синтеза комплементарных цепей ДНК с помощью термостабильной ДНК-полимеразы. В результате проведения N циклов амплификации концентрация синтезированного фрагмента в исследуемой пробе увеличивается в 2 раза (например, в миллион раз после 20 циклов), что позволяет учитывать результаты анализа с помощью электрофореза ДНК в агарозном геле. РКВС является делеционным мутантом вируса ТГС. Тест-система устроена таким образом, что после проведения ПЦР на матрице вируса ТГС образуется фрагмент размером 874 п. н., тогда как на матрице РКВС образуются короткие фрагменты размером 192 - 253 п. н. (в зависимости от штамма). Места посадки праймеров являются консервативными для вирусов ТГС и РКВС, следовательно, условия амплификации также будут одинаковые. С помощью размеров ПЦР-фрагмента происходит дифференцирование двух вирусов.

Показания

Для обнаружения вируса ТГС и дифференцирования его от РКВС. С помощью данной тест-системы вирус ТГС может быть обнаружен в инфицированных культурах клеток и патматериале от больных животных (кровь, сперма, фекалии, образцы кишечника, кусочки органов от павших или вынужденно убитых животных).

Дозы и способ применения

Выделение РНК из исследуемого биологического материала проводят с помощью Набора для выделения РНК. Подготовка исследуемых образцов - СПЕРМА: 200 мкл сперма переносят в полипропиленовую пробирку на 1,5 мл и используют для анализа. КРОВЬ: Допускается однократное замораживание проб до исследования при температуре минус 8 C - минус 20 C. 200 мкл крови переносят в полипропиленовую пробирку на 1,5 мл и используют для анализа. ТКАНИ: Ткани гомогенизируют в физиологическом растворе или в растворе для выделения № 1. 200 мкл гомогената переносят в полипропиленовую пробирку на 1,5 мл и используют для анализа. ФЕКАЛИИ: суспендируют в фосфатном буфере, затем центрифугируют при 9000 g в течение 10 минут при 4 C. Для выделения РНК используют 200 мкл супернатанта. Выделение РНК для анализа: Образцы исследуемого биологического материала (в объеме до 200 мкл) помещают в полипропиленовые пробирки объемом 1,5 мл и добавляют 1,1 мл раствор № 1. Инкубируют 10 минут при температуре (20 + 2 C), периодически перемешивая. Пробы центрифугируют в настольной центрифуге типа 1 минуту при 13000 об/мин. После центрифугирования надосадочную жидкость переносят в чистые пробирки, а осадок отбрасывают. К полученной суспензии добавляют 40 мкл сорбента и инкубируют при температуре (20 + 2 C) в течение 10 минут, 1 - 2 раза перемешивая на смесителе типа . Затем центрифугируют 15 секунд на микроцентрифуге при 13000 об/мин, надосадочную жидкость отбрасывают. К осадку добавляют 0,1 мл раствора № 2, перемешивают на смесителе типа и осаждают сорбент центрифугированием в течение 15 секунд, надосадочную жидкость отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. К осадку добавляют 0,1 мл раствора № 3, перемешивают на смесителе типа и осаждают сорбент центрифугированием в течение 15 секунд, надосадочную жидкость отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. Осадок подсушивают в течение 10 - 15 минут при 56 C с открытой крышкой. К осадку добавляют 30 мкл деионизованной воды, перемешивают и инкубируют 10 - 15 минут при 56 C в закрытых пробирках. Центрифугируют в течение 1 минуты при 13000 об/мин. Отобранную надосадочную жидкость используют для проведения ПЦР. На всех стадиях обработки биоматериала удаление супернатанта производить одноразовыми пластиковыми наконечниками при помощи водоструйного насоса в колбу-ловушку, содержащую дезинфицирующий раствор (3 % хлорамин или 5 % перекись водорода и т. п.) Все манипуляции, связанные с использованием тест-системы ПЦР, проводятся пипеточными дозаторами типа следующих объемов: 0 - 20 мкл, 20 - 200 мкл, 0 - 1000 мкл с использованием полипропиленовых пробирок на 1,5 мл (ПО ) и 0,5 мкл и наконечников к пипеточным дозаторам одноразового использования. Проведение реакции амплификации: Реакцию амплификации проводят, используя Набор для выявления РНК вируса ТГС и РКВС методом ПЦР. Для выявления РНК вируса ТГС и дифференциации его от РКВС был разработан метод ОТ-ПЦР . При данной постановке реакции стадия обратной транскрипции и стадия амплификации проходят в одной пробирке, последовательно. При этом преимуществом является то, что данная постановка реакции уменьшает вероятность получения ложноположительных результатов, т. к. не требуется дополнительного открывания пробирок. Пробирки для ОТ-ПЦР подготавливают, пронумеровав их и поставив их в штатив по порядку. Вместе с пробирками для исследуемых проб подготавливают пробирки для K+ (РНК, выделенная из 20 мкл контрольной культуры, прилагающейся к набору и K- (деионизованная вода). Подготавливают смесь для ОТ-ПЦР по следующей схеме: (в число пробирок N входят и контроли) Реактив на 1 пробу (мкл) на проб Реакционный буфер для ОТ-ПЦР (p-p № 6) 15,12 15,12 х (N+1) Праймеры ПЦР-1 (p-p № 4) 4,5 15,12 х (N+1) Термостабильная ДНК-полимераза (p-p № 1) 0,25 0,25 х (N+1) Мезофильная ревертаза (p-p № 2) 0,13 0,13 х (N+1) Мезофильная ревертаза и термостабильная ДНК-полимераза добавляется в последнюю очередь. После добавления всех компонентов смесь перемешивают пипетированием и разливают по пробиркам по 20 мкл. Затем в каждую пробирку добавляют по 5 мкл выделенной РНК. В пробирку с K+ добавляют 5 мкл РНК, выделенной из 20 мкл контрольной культуры, а в пробирку с K- добавляют 5 мкл деионизованной воды и перемешивают пипетированием. Если образовались капли на стенках пробирки, то их осаждают центрифугированием (1300 об/мин 5 - 10 секунд). На поверхность водной фазы осторожно наносят 40 мкл (2 - 3 капли) вазелинового масла. Пробы амплифицируют на амплификаторе. Температурный режим: 50 °C - 60 минут 95 °C - 5 минут 1 цикл 95 °C - 30 секунд 55 °C - 30 секунд 5 циклов 72 °C - 50 секунд 95 °C - 30 секунд 60 °C - 30 секунд 25 циклов 72 °C - 50 секунд 72 °C - 5 минут 1 цикл После проведения амплификации проводят реакцию реамплификации. Реакцию реамплификации проводят согласно выше изложенному, но вместо 5 мкл РНК добавляют 5 мкл продукта ПЦР-1 и вместо праймеров ПЦР-1 добавляют праймеры ПЦР-2 (p-p № 5). Матрицу вносят в последнюю очередь. Смесь для ПЦР-2: Реактив на 1 пробу (мкл) на проб Реакционный буфер для ОТ-ПЦР (p-p № 6) 15,25 15,25 х (N+1) Праймеры ПЦР-2 (p-p № 4) 4,5 4,5 х (N+1) Термостабильная ДНК-полимераза (p-p № 1) 0,25 0,25 х (N+1) Температурный режим циклов ПЦР: 95 °C - 30 секунд 55 °C - 30 секунд 5 циклов 72 °C - 50 секунд 95 °C - 30 секунд 60 °C - 30 секунд 25 циклов 72 °C - 50 секунд 72 °C - 5 минут 1 цикл Реакция Матрица Праймеры Амплификация кДНК смесь праймеров № 1 Реамплификация 1-я амплификация смесь праймеров № 2 Соотношение циклов амплификации и реамплификации 30 : 30. Учет результатов амплификации. Результаты исследования учитываются путем анализа продуктов амплификации исследуемых образцов методом электрофореза в агарозном геле (Набор для проведения электрофореза). Приготовление буфера для электрофореза. Для приготовления 1 л однократного буфера для электрофореза к 20 мл 10 х TAE буфера добавить 980 мл дистиллированной воды и 25 мкл раствора бромистого этидия (p-p № 16). Буфер можно приготовить самостоятельно по следующей прописи: навеску 4,04 г триса растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 1,14 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл 0,5 М раствора ЭДТА pH 8 и доводят объем буфера до 1000 мл дистиллированной водой. После растворения компонентов буфера добавляют 25 мкл раствора бромистого этидия (p-p № 16). Приготовление агарозного геля. К 100 мл однократного буфера для электрофореза добавляют 2 г агарозы, доводят до кипения и охлаждают до 45 °C . Заливают в специальную форму с гребенкой и дают затвердеть. Гребенку осторожно вынимают и форму с агарозой переносят в аппарат для горизонтального электрофореза (ПГ-9 ) и погружают в буфер. Электрофорез продуктов амплификации. К 7 мкл полученной амплификационной смеси (водной фазы) добавляют 1,5 мкл буфера для внесения образца (раствор № 7), перемешивают пипетированием и полученный образец вносят в лунки агарозного геля, образовавшиеся от зубцов гребенки. Электрофорез проводят при напряжении 8 вольт/см длины геля, в течение 60 минут. За это время краситель успевает пройти не менее половины геля. Направление движения образцов в геле от к . Учет результатов электрофореза. Результаты электрофореза просматривают в ультрафиолетовом свете с длинной волны 254 нм на приборе . После окрашивания результаты реакции выявляются в виде светящихся красноватых полос. Положительными (т. е. содержащими вирус ТГС) считаются пробы, в которых полосы в геле располагаются на таком же расстоянии от страта, что и полоса положительного контроля. Если в пробе содержится вирус РКВС, размер амплификационного фрагмента будет 192 - 253 п. н. (в зависимости от штамма). Исследуемые пробы считаются отрицательными, если в них не выявлено никаких полос или они не соответствуют по размеру фрагменту в положительном контроле (располагаются на другом расстоянии от страта). В отрицательном контроле не должно выявляться никаких полос. Размер фрагментов после проведения ПЦР на матрице РНК вируса ТГС и РКВС. Матрица Размер фрагментов ПЦР-1 ПЦР-2 Вирус ТГС 1006 п. н. 874 п. н. РКВС 325 -385 п. н. 192 - 253 п. н. Полученные результаты можно документировать на фотопленке аппаратом типа с оранжевым светофильтром.

Особые указания

Строгое соблюдение условий хранения компонентов. Разовое (однократное) использование наконечников и пробирок. Ранее использованные и мытые наконечники и пробирки использовать нельзя. При составлении смеси для амплификации вначале готовить отрицательный контроль, а последним - положительный контроль. Посуда для отбора образцов биоматериала должна быть одноразовой или тщательно обработана хромпиком и отмыта. Пробирки с вирусным материалом должны быть всегда закрытыми. При отборе вируссодержащих суспензий работать наконечниками с фильтром. Перед открыванием пробирок капли жидкости на крышке удалять центрифугированием. При открывании и закрывании пробирок избегать случайного касания руками или инструментами внутренней поверхности крышек.

Условия хранения

Набор 1 - при температуре минус 20 °C, набор 2 и 3 - при температуре от 2 до 6 °C. Транспортирование производят в теплоизолирующей упаковке (термос, пенопластовая коробка) при температуре от минус 10 до минус 20 C). Срок годности - 6 месяцев.

Производитель

Продавец

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ ВИРУСА РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИ-РАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Название (рус.)

Состав и форма выпуска

Состоит из трех наборов и рассчитана на 50 анализов: Наименование Количество Упаковка Набор 1 - для выделения РНК Раствор- 1 32 мл 2 флакона Раствор-2 10 мл 1 флакон Раствор-3 10 мл 1 флакон Сорбент 2 мл 1 пробирка Вода деионизованная 2 мл 1 флакон Набор 2 - для выявления РНК вируса РРСС методом ПЦР Фермент Tag-полимераза (5 ед/мкл) 25 мкл 1 пробирка Фермент MMLV ревертиза (200 ед/мкл) 8 мкл 1 пробирка Положительный контроль (инфицированная инактивированная культура) 25 мкл 1 пробирка Праймеры для ПЦР-1 225 мкл 1 пробирка Праймеры для ПЦР-2 225 мкл 1 пробирка Буфер для ПЦР-1 760 мкл 1 пробирка Буфер для ПЦР-2 770 мкл 1 пробирка Масло 4 мл 1 флакон Набор 3 - для электрофореза Агароза 5 г 1 пакет Буфер для электрофореза (TAE, 50-кратный) 20 мл 1 флакон Бромистый этидий (10 мг/мл) 150 мкл 1 пробирка Буфер для нанесения образца на гель 300 мкл 1 пробирка При точном соблюдении наставления по применению анализ занимает от 8 до 24 часов в зависимости от используемого оборудования. Компоненты набора выпускают в полипропиленовых флаконах фирмы вместимостью 20 мл, и пробирках фирмы Porex Products Group (США) вместимостью 0,5 - 2 мл и 5 мл.

Фармакологические свойства

Идентификация вируса РРСС проводится с использованием ПЦР. В основе метода лежит многократное повторение циклов денатурации исследуемой ДНК при температуре 94 C, гибридизация ДНК со специфическими праймерами при температуре 55 C и синтеза с них комплементарных цепей ДНК с помощью термостабильной ДНК-полимеразы при температуре 72 C. Поскольку геном вируса РРСС представлен молекулой РНК, полный анализ по его выявлению включает выделение суммарной РНК, получение кДНК и амплификацию специфического фрагмента ДНК в совмещенной реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции, электрофорез в агарозном геле. В результате амплификации концентрация синтезированного фрагмента в исследуемой пробе увеличивается в миллионы раз, что позволяет визуально учитывать результаты анализа с помощью электрофореза в агарозном геле.

Показания

Для обнаружения вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в инфицированных культурах и патматериале от больных животных (кровь, сыворотка, сперма, носовые и конъюнктивальные смывы, органы павших или вынужденно убитых животных).

Дозы и способ применения

Подготовка исследуемого материала. СПЕРМА: не требует специальной подготовки. Для исследования берут 200 мкл. КРОВЬ: Допускается однократное замораживание проб в интервале температур от минус 8 C до минус 20 C. Для анализа берут 200 мкл. ТКАНИ ОРГАНОВ: гомогенизируют в физиологическом растворе или в растворе-1 для выделения РНК. Для анализа используют 200 мкл гомогената, осветленного низкоскоростным центрифугированием. КОНТРОЛИ: Положительным контролем служит инфецированная вирусом РРСС культура клеток. Для исследования берут 50 мкл. В качестве отрицательного контроля используют деионизованную воду. Выделение РНК из исследуемого биологического материала проводят с помощью Набора 1 - для выделения РНК. В каждой серии анализов параллельно ставят реакции с положительным и отрицательным контролями. Смеси для контрольных образцов готовят по той же прописи, что и для исследуемых образцов. На всех этапах анализа в первую очередь проводят манипуляции с отрицательным контролем, затем с исследуемыми образцами и в последнюю очередь с положительным контролем. Во избежание перекрестной контаминации до начала работы маркируют чистые пробирки объемом 1,5 мкл и вносят в них по 600 мкл раствора-1. После этого приступают к работе с инфицированным материалом. Образцы исследуемого биологического материала (в объеме до 200 мкл) добавляют в подготовленные пробирки, содержащие 600 мкл раствора-1. Инкубируют 10 - 15 минут при комнатной температуре, периодически плавно перемешивая. Центрифугируют в настольной центрифуге типа 1 минуту при 13000 об/мин. Надосадочную жидкость переносят в чистые пробирки, а осадок отбрасывают. К надосадочной жидкости добавляют 40 мкл сорбента (сорбент перед использованием необходимо тщательно ресуспендировать, инкубируют при комнатной температуре в течение 10 минут 1 - 2 раза перемешивая на смесителе типа . Центрифугируют 10 - 15 секунд на микроцентрифуге при 6000 - 13000 об/мин, надосадочную жидкость отбрасывают. К осадку добавляют 0,1 мл раствора-2, суспендируют и осаждают сорбент центрифугированием в течение 15 секунд, надосадочную жидкость отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. К осадку добавляют 0,1 мл раствора-3, перемешивают, центрифугируют 15 секунд, надосадочную жидкость отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. Осадок подсушивают в течение 5 - 10 минут при 56 C с открытой крышкой. К осадку добавляют 30 мкл деионизованной воды для элюции РНК с сорбента, перемешивают и инкубируют 10 - 15 минут при 56 C в закрытых пробирках. Центрифугируют в течение 0,5 минут при 13000 об/мин. Отобранную надосадочную жидкость используют для проведения ПЦР. На всех стадиях обработки биоматериала удаление супернатанта производить одноразовыми пластиковыми наконечниками при помощи вакуумного насоса в колбу-ловушку с дезинфицирующим раствором (3 % хлорамин или 5 % перекись водорода и т. п.). Реакция совмещенной обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции. Для выполнения стадий используют Набор 1 для выявления вируса РРСС методом ПЦР. В отдельные пробирки готовят общую реакционную смесь на N образцов, в число которых входят положительные и отрицательные контроли. Реактивы вносят в последовательности, приведенной в таблице. Работу желательно проводить на холоде. Реактив Количество на 1 пробу (мкл) Количество на N проб Буфер для ПЦР-1 15,125 15,125 х (N+1) Праймеры для ПЦР-1 4,5 4,5 х (N+1) Фермент Tag-полимераза 0,25 0,25 х (N+1) Фермент MMLV ревертаза 0,125 0,125 х (N+1) Ферменты добавляют в последнюю очередь. Смесь перемешивают, избегая образования пены, и немедленно раскапывают по 20 мкл в предварительно промаркированные пробирки, добавляют 40 мкл (2 - 3 капли) масла, затем вносят по 5 мкл РНК соответствующих анализируемых или контрольных образцов. После этого пробы помещают в амплификатор со следующим температурным режимом: 50 °C - 45 минут 94 °C - 5 минут 1 цикл 94 °C - 0,5 минут 55 °C - 0,5 минут 25 циклов 72 °C - 0,5 минут Полимеразная цепная реакция. Проведение полимеразной цепной реакции (ПЦР-2). В отдельной пробирке готовят общую реакционную смесь на N образцов, в число которых входят положительный и отрицательный контроли. Реактивы вносят в последовательности, приведенной в таблице. Работу желательно проводить на холоде. Реактив Количество на 1 пробу (мкл) Количество на N проб Буфер для ПЦР-2 15,25 15,25 х (N+1) Праймеры для ПЦР-2 4,5 4,5 х (N+1) Tag-полимераза 0,25 0,25 х (N+1) Реактивы смешивают в последовательности, как они перечислены в таблице. Последним вносят фермент Tag-полимераза. Смесь перемешивают и разливают по 20 мкл в предварительно промаркированные пробирки для ПЦР. В каждую пробирку добавляют по 2 - 3 капли масла (примерно 40 мкл). В последнюю очередь в соответствующие пробирки вносят по 5 мкл продукта реакции ПЦР-1, затем пробы помещают в амплификатор со следующим температурным режимом: 94 °С - 0,5 минут 55 °С - 0,5 минут 25 циклов 72 °C - 0,5 минут Учет результатов амплификации. Продукты ПЦР-2 анализируют методом электрофореза в агарозном теле с помощью Набора 3 для электрофореза. Приготовление буфера для электрофореза. Для приготовления 1 л однократного буфера для электрофореза к 20 мл 50 х TAE буфера добавляют 980 мл дистиллированной воды и 40 мкл раствора бромистого этидия. Примечание: Буфер можно приготовить самостоятельно по следующей прописи: навеску 4,04 г основного триса растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 1,14 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл дистиллированной воды, добавляют 1,14 мл ледяной дистиллированной водой. После растворения компонентов добавляют 40 мкл раствора бромистого этидия. Приготовление агарозного геля. В термостойкой посуде готовят необходимый объем 2 % суспензии агарозы на однократном буфере для электрофореза и нагревают на электроплите или в микроволновой печи до полного растворения агарозы. Расплавленную агарозу охлаждают до 45 °С, постоянно перемешивая, размешивают, заливают форму с гребенкой и дают затвердеть. Форму с образовавшимся агарозным гелем переносят в аппарат для горизонтального электрофореза, погружают в буфер и осторожно вынимают гребенку. Оставшуюся часть затвердевшей агарозы можно повторно расплавить и использовать для приготовления геля. Электрофорез продуктов амплификации. В пробирки с исследуемыми образцами после завершения ПЦР-2 добавляют по 3 мкл буфера для нанесения образца, перемешивают пипетированием (4 - 5 раз), отбирают по 10 мкл окрашенной водной фазы и вносят в лунки агарозного геля, образовавшиеся от зубцов гребенки. Электрофорез проводят при напряжении 8 воль/см длины геля до тех пор, пока краситель пройдет от страта не менее половины геля (примерно 30 - 60 минут). Направление движения образцов в геле от к . Учет результатов электрофореза. Результаты электрофореза учитывают, просматривая гель в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе . Амплифицированные фрагменты ДНК фрагменты ДНК выявляются в виде светящихся красноватых полос. Положительными считают пробы, полосы в которых располагаются в геле точно на таком же расстоянии от старта, что и полоса положительного контроля (фрагмент длиной около 290 п. н.). В отрицательном контроле не должно выявляться никаких полос. Исследуемые пробы считают отрицательными, если в них не выявлено никаких полос или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т. е. располагаются на другом расстоянии от старта). Присутствие в отрицательном контроле окрашенных фрагментов на уровне полос положительного контроля свидетельствует о перекрестной контаминации в процессе анализа. Результаты аннулируются. Анализ необходимо провести заново. Для документирования полученных результатов используют фотопленку и аппарат типа с оранжевым светофильтром, либо фото- и видеосистемы.

Особые указания

Бромистый этидий является мутагеном, проникающим через кожу. При работе с ним использовать перчатки. Бромистый этидий разлагается на свету и при нагревании. Содержащие его растворы хранят в темном месте. При длительном хранении или многократном нагревании в них следует внести свежую порцию бромистого этидия (5 мкл на 100 мл буфера) перед употреблением. Ультрафиолет вызывает ожоги слизистой оболочки глаз. При просмотре гелей пользоваться защитным экраном или очками. Необходимые условия успешного проведения анализа. Строгое соблюдение условий хранения компонентов тест-системы. Однократное использование пластиковой посуды. Ранее использованные и мытые наконечники и пробирки использовать нельзя. При составлении смеси для амплификации вначале готовить отрицательный контроль, а последним - положительный контроль. Посуда для отбора образцов биоматериала должна быть одноразовой или тщательно обработана хромпиком, отмыта, простерилизована.

Условия хранения

Производитель

Продавец

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ВИДА BACILLUS ANTHRACIS МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Название (рус.)

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ВИДА BACILLUS ANTHRACIS МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Состав и форма выпуска

Состоит из трех наборов и рассчитана на проведение 50 анализов: Наименование Количество Упаковка Набор 1 - для выделения ДНК Буфер выделения 5 мл 1 флакон Буфер гомогенизации 25 мл 1 флакон Набор 2 - для выявления B. anthracis методом ПЦР Фермент Tag-полимераза (5 ед/мкл) 13 мкл 1 пробирка Праймеры для ПЦР 225 мкл 1 пробирка Положительный контроль (рекомбинантная ДНК B. anthracis) 50 мкл 1 пробирка Буфер для ПЦР 800 мкл 1 пробирка Вода деионизованная 2 мл 1 флакон Масло 2 мл 1 флакон Набор 3 - для электрофореза Агароза 5 г 1 пакет Буфер для электрофореза (TAE, 50-кратный) 20 мл 1 флакон Бромистый этидий (10 мг/мл) 150 мкл 1 пробирка Буфер для нанесения образца на гель 300 мкл 1 пробирка При соблюдении наставления по применению анализ занимает 6 - 8 часов. Компоненты наборов расфасовывают в полипропиленовые флаконы фирмы вместимостью 20 мл, микропробирки и пробирки фирмы Porex Bio Products Group (США) вместимостью 05 - 2 мл и 5 мл.

Фармакологические свойства

Идентификация бактерий вида Bacillus anthracis основана на обнаружении и амплификации фрагмента гена капсулообразования CapB с помощью полимеразной и цепной реакции, которая представляет собой многократное цикличное повторение трех процессов: тепловая денатурация ДНК в исследуемой пробе; гибридизация () исследуемой ДНК со специфическими олигонуклеотидными зондами (праймерами); синтез комплементарных цепей ДНК с помощью термостабильной ДНК-полимеразы. выделение суммарной ДНК; ПЦР, то есть реакция амплификации фрагмента гена CapB; электрофорез продуктов ПЦР в агарозном теле. Результаты электрофореза являются основанием для заключения о наличии или отсутствии возбудителя сибирской язвы в исследуемом образце.

Показания

Для выявления и идентификации бактерий вида bacillus anthracis (возбудитель сибирской язвы), содержащих ген капсулообразования (Сар И). Данная тест-система позволяет обнаружить капсулообразующие бактерии Bacillus anthracis в вегетативной форме в микробиологических культурах и жидких пробах из объектов окружающей среды в концентрации 10³ кл/мл, а также в патматериале от больных и павших животных (кровь, селезенка, сердце, печень) в концентрации 2 х 10³ кл в 1 г ткани.

Дозы и способ применения

Подготовка исследуемого материала и выделение ДНК. Подготовку образцов проводят в изолирующем боксе, в условиях работы с микроорганизмами 2 группы опасности. Все операции выполняют стерильными инструментами с использованием стерильной, химически чистой стеклянной и одноразовой пластиковой посуды. Жидкие пробы (вода, суспензии бактерий, смывы) в объеме 1 мл помещают в полипропиленовые пробирки объемом 1,5 мл и центрифугируют 5 минут в настольной центрифуге при 10000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно удаляют. Осадок суспендируют в 100 мкл при 10000 об/мин. Надосадочную жидкость используют для проведения. (Примечание: чтобы избежать самопроизвольного открывания пробирок при нагревании следует придавить их сверху грузом или использовать специальные пробирки с защелкой). Во избежание перекрестной контаминации до начала работы маркируют чистые пробирки и вносят в них по 100 мкл буфера выделения. После этого приступают к работе с инфицированным материалом. Пробы патматериала от больных или павших животных: кусочки селезенки, лимфоузлов, сердца, примерно, по 0,5 г - растирают с помощью стеклянного гомогенизатора Поттера или в фарфоровой ступке и гомогенизируют в 0,5 мл буфера гомогенизации. Гомогенат осветляют центрифугированием при 5000 об/мин, 100 мкл надосадочной жидкости смешивают с 100 мл буфера выделения, прогревают 20 минут при 100 °C, центрифугируют 5 минут при 10000 об/мин. Надосадочную жидкость используют для проведения ПЦР. Пробы крови животных в объеме 100 мкл смешивают с 100 мкл буфера выделения, прогревают 20 минут при 100 °C, затем центрифугируют 5 минут при 10000 об/мин. Надосадочную жидкость используют для проведения ПЦР. Проведение реакции амплификации ДНК. В отдельной пробирке готовят общую реакционную смесь на N образцов с учетом положительного и отрицательного контролей: Реактив Количество на 1 пробу (мкл) Количество на N проб Буфер для ПЦР-2 15,25 15,25 х (N+1) Праймеры для ПЦР-2 4,5 4,5 х (N+1) Tag-полимераза 0,25 0,25 х (N+1) Работу желательно проводить на холоде. Реактивы смешивают в последовательности, как они перечислены в таблице. Последним вносят фермент Tag-полимеразу. Смесь перемешивают и разливают по 20 мкл в предварительно промаркированные пробирки для ПЦР. В каждую пробирку раскапывают по 2 - 3 капли масла (примерно 40 мкл). В последнюю очередь в соответствующие пробирки вносят по 5 мкл ДНК, выделенной из анализируемых проб, перемешивают пипетированием (4 5 раз), затем пробы помещают в амплификатор со следующим температурным режимом: 94 °C - 0,5 минут 50 °C - 0,5 минут 30 циклов 72 °C - 0,5 минут Контроли - положительный и отрицательный. В каждой серии анализов параллельно проводят реакции с контрольными образцами: положительным контролем (K+) служит рекомбинантная (плазмидная) ДНК B. anthracis (5 мкл). Отрицательным контролем (K-) служит деионизованная вода (5 мкл). Смеси для контрольных образцов готовят по той же прописи, что и для исследуемых образцов. На всех этапах анализа в первую очередь проводят манипуляции с отрицательным контролем, затем с исследуемыми образцами и в последнюю очередь с положительным контролем. Учет результатов амплификации. Продукты ПЦР анализируют методом электрофореза в агарозном геле с помощью. Набор 3 для электрофореза. Приготовление буфера для электрофореза. Для приготовления 1 л однократного буфера к 20 мл 50-кратного буфера для электрофореза (50 х TAE) добавляют 980 мл дистиллированной воды и 40 мкл раствора бромистого этидия. Примечание. Буфер можно приготовить самостоятельно по следующей прописи: навеску 4,04 г. Триса (гидроксиламинометана) растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 1,14 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл 0,5 М раствора ЭДТА pH 8 и доводят объем до 1000 мл дистиллированной водой. После растворения всех компонентов добавляют 40 мл раствора бромистого этидия. Приготовление агарозного геля. К 100 мл однократного буфера для электрофореза добавляют 2 г. агарозы и нагревают на электроплите или в микроволновой печи до полного растворения агарозы. Расплавленную агарозу охлаждают до 45 °C, постоянно перемешивая, размешивают, заливают в специальную форму с гребенкой и дают затвердеть. Форму с образовавшимся агарозным гелем переносят в аппарат для горизонтального электрофореза, погружают в буфер и осторожно вынимают гребенку. Оставшуюся часть затвердевшей агарозы можно повторно расплавить и использовать для приготовления геля. Электрофорез продуктов амплификации. В пробирки с исследуемыми образцами после завершения амплификации вносят по 3 мкл буфера для нанесения образца и по 10 мкл окрашенной водной фазы вносят в лунки агарозного геля, образовавшиеся от зубцов требенки. Электрофорез проводят при напряжении 8 вольт/см длины геля до тех пор, пока краситель пройдет от старта не менее половины геля (примерно 30 - 60 минут). Направление движения образцов в геле от к . Учет результатов электрофореза. Результаты электрофореза учитывают, просматривая гель в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе Амплифицированные фрагменты ДНК выявляются в виде светящихся красноватых полос. Положительными (содержащими ДНК капсульного штамма Bacilus anthracis) считают пробы, полосы в которых располагаются в геле точно на таком же расстоянии от старта, что и полоса положительного контроля (фрагмент длиной 300 п. н.). В отрицательном контроле не должно выявляться никаких полос. Исследуемые пробы считают отрицательными, если в них не выявлено никаких полос или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т. е. располагаются на другом расстоянии от старта). Присутствие в отрицательном контроле окрашенных фрагментов на уровне полос положительного контроля свидетельствует о перекрестной контаминации в процессе анализа. Результаты аннулируются. Анализ необходимо провести заново. Для документирования полученных результатов используют фотопленку и аппарат типа с оранжевым светофильтром, либо другие фото- и видеосистемы.

Особые указания

Бромистый этидий является мутагеном, проникающим через кожу. При работе с ним использовать резиновые перчатки. Бромистый этидий разлагается на свету и при нагревании. Содержащие его растворы хранят в темном месте. При длительном хранении или многократном нагревании в них следует внести свежую порцию бромистого этидия (5 мкл на 100 мл буфера) перед употреблением. Ультрафиолет вызывает ожоги слизистой оболочки глаз. При просмотре гелей пользоваться защитным экраном или очками. Строгое соблюдение условий хранения компонентов тест-системы. Однократное использование пластиковой посуды. Ранее использованные и мытые наконечники и пробирки использовать нельзя. Посуда для отбора образцов биоматериала должна быть одноразовой или тщательно обработана хромпиком, отмыта, простерилизована.

Условия хранения

Производитель

Продавец

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ M. BOVIS И M. TUBERCULOSIS МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Название (рус.)

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ И ДИФФЕРЕНЦИАЦИИ M. BOVIS И M. TUBERCULOSIS МЕТОДОМ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ (ПЦР)

Состав и форма выпуска

Состоит из трех наборов и рассчитана на выделение ДНК из 25 образцов и проведение 50 реакций ПЦР с двумя парами праймеров для двух видов микобактерий. Наименование Количество Упаковка Набор 1 - для выделения ДНК Раствор-1 7,5 мл 1 флакон Раствор-2 17 мл 1 флакон Раствор-3 5 мл 1 флакон Раствор-4 7,5 мл 1 флакон Сорбент 0,5 мл 1 пробирка Лизоцим 0,08 г 1 пробирка Вода деионизованная 2 мл 1 флакон Набор 2 - для определения ДНК микобактерий методом ПЦР Буфер для ПЦР 1,6 мл 1 пробирка Фермент Tag-полимераза (5 ед/мкл) 25 мкл 1 пробирка Масло 4 мл - Комплект реагентов для детекции ДНК Mycobacterium bovis и Mycobacterium tuberculosis Праймеры T2 и T2A для ПЦР-1 120 мкл 1 пробирка Праймеры T4 и T4A для ПЦР-2 120 мкл 1 пробирка Положительный контроль (вакцинный штамм M. bovis BCG, лиофилизированный) 0,5 мг 1 ампула Комплект реагентов для детекции ДНК Mycobacterium tuberculosis Праймеры T1 и T1A для ПЦР-1 120 мкл 1 пробирка Праймеры T3 и T3A для ПЦР-2 120 мкл 1 пробирка Положительный контроль (ДНК M. tuberculosis) 15 мкл 1 пробирка Набор 3 - для электрофореза Агароза 5 г 1 пакет Буфер для электрофореза (TAE, 50-кратный) 20 мл 1 флакон Бромистый этидий (10 мг/мл) 150 мкл 1 пробирка Буфер нанесения образца на гель 300 мл 1 пробирка Время проведения анализа при точном соблюдении наставления по применению занимает 8 - 16 часов. Компоненты наборов расфасовывают в полипропиленовые флаконы фирмы вместимостью 20 мл, микропробирки и пробирки фирмы Porex Bio Products Group (США) вместимостью 0,5 - 2 мл и 5 мл.

Фармакологические свойства

Тест-система, фактически, включает два набора для выявления микобактерий: один из них является универсальным и позволяет обнаружить как M. bovis, так и M. tuberculosis (Комплект реагентов для детекции ДНК Mycobacterium bovis и Mycobacterium tuberculosis), а другой предназначен для выявления M. tuberculosis (Комплект реагентов для детекции ДНК Mycobacterium tuberculosis). Идентификацию микобактерий проводят с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). В основе метода лежит многократное цикличное повторение трех процессов: тепловой денатурации ДНК; гибридизации () исследуемой ДНК со специфическими олигонуклеотидными зондами (праймерами); синтеза комплементарных цепей ДНК с помощью термостабильной ДНК-полимеразы. В результате проведения N циклов амплификации концентрация синтезированного фрагмента в исследуемой пробе увеличивается в 2n раз (например, в миллион раз после 20 циклов), что позволяет визуально учитывать результаты анализа с помощью электрофореза в агарозном геле. Для детекции микобактерий применяется двухступенчатая, так называемая, модификация метода ПЦР с использованием внутренних и внешних праймеров. Для индикации суммарной ДНК Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium bovis используют внешние праймеры T2/Е2A в ПЦР-1 и внутренние T4/T4A в ПЦР-2. Для идентификации ДНК Mycobacterium tuberculosis используют внешние праймеры T1/T1A в ПЦР-1 и внутренние T3/T3A в ПЦР-2.

Показания

Для выявления и дифференцирования ДНК Mycobacterium bovis и Mycobacterium tuberculosis в патматериалах от животных, а также культурах микобактерий.

Дозы и способ применения

Подготовка исследуемого материала к работе. КРОВЬ: Используют без предварительной подготовки. Для анализа достаточно 200 мкл крови. ФАРИНГЕАЛЬНЫЕ СМЫВЫ: 5 - 10 мл центрифугируют при 5000 об/мин в течение 10 минут, надосадочную жидкость осторожно отбирают и отбрасывают так, чтобы над осадком осталось примерно 200 мкл жидкости. Осадок суспендируют в оставшемся над осадком объеме жидкости и переносят в полипропиленовую пробирку на 1,5 мл. В случае фарингеальных смывов суспензию используют для выделения ДНК. Надосадочную жидкость отбрасывают, осадок используют для выделения ДНК. БРОНЗИАЛЬНАЯ СЛИЗЬ: Используют без предварительной подготовки. Для анализа достаточно 200 мкл слизи. ОРГАНЫ: кусочки паренхиматозных органов, лимфоузлов (10 - 20 мг) измельчают ножницами и растирают до гомогенного состояния в физиологическом растворе. Для анализа используют 200 мкл полученной неосветленной суспензии. КОНТРОЛИ: Положительным контролем (K+) служит лиофилизированный вакцинный штамм M. bovis BCG. Содержимое одной ампулы растворить в 100 мкл деионизованной воды, разделить на аликвоты (от 25 до 100 мкл) и хранить в защищенном от света месте в замороженном состоянии (разведенная вакцина неустойчива на свету). Размораживать аликвоту непосредственно перед использованием. Неизрасходованный материал положительного контроля повторной заморозке не подлежит. Выделение ДНК из исследуемого биологического материала проводят с помощью Набора 1 - для выделения ДНК. Подготовка раствора. В раствор-1 добавляют лизоцим до конечной концентрации 10 мг/мл. Данный раствор готовят непосредственно перед употреблением и хранят не более 2 дней при температуре 4 °C. Во избежание перекрестной контаминации до начала работы маркируют чистые пробирки объемом 1,5 мл и вносят в них по 200 мкл раствора-1 с лизоцимом. После этого приступают к работе с инфицированным материалом. В подготовленные пробирки с раствором-1 (200 мкл с лизоцимом) вносят по 200 мкл исследуемого биологического материала, перемешивают на смесителе типа Vortex, инкубируют 10 минут при комнатной температуре, затем 15 минут при температуре 95 °C в воздушном или водяном термостате. Пробы центрифугируют в настольной центрифуге типа в течение 2 минут при 10000 - 13000 об/мин. Надосадочную жидкость отбирают для проведения анализа, а осадок отбрасывают. Примечание: чтобы избежать самопроизвольного открывания пробирок при нагревании, следует придавить их сверху грузом или использовать специальные пробирки с защелкой). К надосадочной жидкости добавляют 0,6 мл раствор-2 и 20 мкл сорбента перед использованием необходимо тщательно ресуспендировать). Пробы тщательно перемешивают и инкубируют при комнатной температуре в течение 15 минут. Во время инкубации необходимо 3 - 5 раз встряхнуть пробирки, чтобы предотвратить выпадение сорбента на дно. Затем пробы центрифугируют 10 - 15 секунд при 10000 - 13000 об/мин для осаждения сорбента, надосадочную жидкость отбрасывают. К осадку добавляют 100 мкл раствора-3, перемешивают на смесителе, центрифугируют в течение 15 секунд. Супернатант отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. К осадку добавляют 100 мкл раствора-4, перемешивают, центрифугируют в течение 15 секунд. Надосадочную жидкость отбрасывают. Процедуру повторяют 2 раза. Осадок подсушивают при 56 °C в течение 5 - 10 минут с открытой крышкой. К осадку добавляют 30 мкл деионизованной воды для элюции ДНК с сорбента, перемешивают и инкубируют 10 - 15 минут при 56 °C в закрытых пробирках. Центрифугируют в течение 0,5 минут при 13000 об/мин. Отобранную надосадочную жидкость используют для проведения ПЦР. На всех стадиях обработки биоматериала удаление супернатанта производить одноразовыми пластиковыми наконечниками при помощи водоструйного насоса в колбу-ловушку с дезинфицирующим раствором (3 % хлорамин или 5 % перекись водорода и т. п.). Работа с контрольными образцами. В каждой серии анализов параллельно проводят реакции с положительным и отрицательным контролями, при этом в первую очередь осуществляют все манипуляции с отрицательными контролями, затем с исследуемыми пробами и в последнюю очередь - с положительными контролями. Положительным контролем выделения ДНК служит вакцинный штамм V. bovis BCG. Для выделения ДНК достаточно 20 мкл. В качестве отрицательного контроля выделения ДНК используют деионизованную воду. Положительным контролем ПЦР служит ДНК M. tuberculosis. При постановке ПЦР для идентификации M. tuberculosis берут 5 мкл контрольной ДНК. В качестве отрицательного контроля ПЦР используют деионизованную воду. Полимеразная цепная реакция проводится с компонентами Набора 2 для определения ДНК микобактерий методом ПЦР Для каждой исследуемой пробы параллельно ставят две реакции. Одна из них позволяет обнаружить как M. bovis, так и M. tuberculosis с помощью универсальных праймеров (T2.T2A в ПЦР-1 и T4/T4A в ПЦР-2). Другая предназначена для выявления M. tuberculosis с помощью специфичных праймеров (T1/T1A в ПЦР-1 и T3/T3A в ПЦР-2). При постановке гнездовой ПЦР применяют следующие смеси праймеров: Объект анализа Праймеры ПЦР-1 Праймеры ПЦР-2 Mycobacterium bovis и Mycobacterium tuberculosis T2/T2A T4/T4A Mycobacterium tuberculosis T1/T1A T3/T3A Проведение первого раунда полимеразной цепной реакции (ПЦР-1). В отдельной пробирке готовят общую реакционную смесь на N образцов, в число которых входят положительные и отрицательные контроли. Реактивы вносят в последовательности, приведенной в таблице. Работу желательно проводить на холоде. Реактив Количество на 1 пробу (мкл) Количество на N проб Буфер для ПЦР-2 15,25 15,25 х (N+1) Праймеры для ПЦР-2 4,5 4,5 х (N+1) Tag-полимераза 0,25 0,25 х (N+1) Реактивы смешивают в последовательности, как они перечислены в таблице. Последним добавляют фермент Tag-полимеразу. Смесь перемешивают и разливают по 20 мкл в предварительно промаркированные пробирки для ПЦР. В каждую пробирку вносят по 5 мкл исследуемой ДНК и осторожно, не касаясь стенок пробирок, наносят по 2 - 3 капли масла (примерно 40 мкл), затем пробы помещают в амплификатор со следующим температурным режимом: 95 °C - 42 секунды 62 °C - 46 секунд 25 циклов 72 °C - 48 секунд Проведение второго раунда ПЦР (ПЦР-2). Все процедуры проводят также, как описано выше, со следующими изменениями: используют праймеры для ПЦР-2 (вместо ПЦР-1); в качестве матрицы используют 5 мкл продукта реакции ПЦР-1. Учет результатов амплификации - Продукты ПЦР-2 анализируют методом электрофореза в агарозном геле с помощью Набора 3 для электрофореза. Приготовления буфера для электрофореза. Для приготовления 1 л однократного буфера для электрофореза к 20 мл 50 х TAE буфера добавляют 980 мл дистиллированной воды и 40 мкл раствора бромистого этидия. Примечание: Буфер можно приготовить самостоятельно по следующей прописи: 4,04 г основного триса растворяют в 200 мл дистиллированной воды, добавляют 1,14 мл ледяной уксусной кислоты и 2 мл о,5 М раствора ЭДТА pH 8 и доводят объем буфера до 1000 мл дистиллированной водой. После растворения компонентов добавляют 40 мкл раствора бромистого этидия. Приготовление агарозного геля. В термостойкой посуде готовят необходимый объем 2 % суспензии агарозы на однократном буфере для электрофореза и нагревают на электроплите или в микроволной печи до полного растворения агарозы. Расплавленную агарозу охлаждают до 45 C, постоянно перемешивая, размешивают, заливают в специальную форму с гребенкой и дают затвердеть. Форму с образовавшимся агарозным гелем переносят в аппарат для горизонтального электрофореза, погружают в буфер и осторожно вынимают гребенку. Оставшуюся часть затвердевшей агарозы можно повторно расплавить и использовать для приготовления. Электрофорез продуктов амплификации. В пробирки с исследуемыми образцами после завершения ПЦР-2 добавляют по 3 мкл буфера для нанесения образца, перемешивают пипетированием (4 - 5 раз), отбирают по 10 мкл окрашенной водной фазы и вносят в лунки агарозного геля, образовавшиеся от зубцов гребенки. Электрофорез проводят при напряжении 8 вольт/см длины геля до тех пор, пока краситель пройдет от старта не менее половины геля (примерно 30 - 60 минут). Направление движения образцов в геле от к . Учет результатов электрофореза. Результаты электрофореза учитывают просматривая гель в ультрафиолетовом свете с длиной волны 254 нм на приборе . Амплифицированные фрагменты ДНК выявляются в виде светящихся красноватых полос. Положительными считают пробы, полосы в которых располагаются в геле на таком же расстоянии от старта, что и полосы положительного контроля. В отрицательном контроле не должно выявляться никаких полос. Исследуемые пробы считают отрицательными, если в них не выявлено никаких полос или полосы не соответствуют по размеру фрагменту в контрольной пробе (т. е. располагаются на другом расстоянии от старта). Присутствие в отрицательном контроле окрашенных фрагментов на уровне полос положительного контроля свидетельствует о перекрестной контаминации в процессе анализа. Результаты аннулируются. Анализ необходимо провести заново. Для документирования полученных результатов используют фотопленку и аппарат типа с оранжевым светофильтром, либо другие фото- и видеосистемы. Интерпретация полученных результатов приведена в таблице: Размер фрагмента в ПЦР-2 с используемыми праймерами Интерпретация результатов Универсальные для M. tuberculosis и M. bovis T2/T2A(ПЦР-1) T4/4A(ПЦР-2) Специфичные для M. tuberculosis T1/T1A(ПЦР-1) T3/T3A(ПЦР-2) - 352 н. п. 377 н. п. В пробе ДНК M. tuberculosis для ДНК M. tuberculosis и M. bovis. 352 н. п. - В пробе ДНК M. bovis.

Особые указания

Бромистый этидий является мутагеном, проникающим через кожу. При работе с ним использовать перчатки. Бромистый этидий разлагается на свету и при нагревании. Содержащие его растворы хранят в темном месте. При длительном хранении или многократном нагревании в них следует внести свежую порцию бромистого этидия (5 мкл на 100 мкл буфера) перед употреблением. Ультрафиолет вызывает ожоги слизистой оболочки глаз. При просмотре гелей пользоваться защитным экраном или очками. Строгое соблюдение условий хранения компонентов. Однократное использование пластиковой посуды. Ранее использованные и мытые наконечники и пробирки использовать нельзя. При составлении смеси для амплификации вначале готовить отрицательный контроль, а последним - положительный контроль. Посуда для отбора образцов биоматериала должна быть одноразовой или тщательно обработана хромпиком, отмыта, простерилизована.

Условия хранения

Производитель

Продавец

ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА И ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИТРА АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ (КЧС) В РЕАКЦИИ МИКРО НЕЙТРАЛИЗАЦИИ С ПОМОЩЬЮ ЦИТОХИМИЧЕСКОГО ВАРИАНТА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО МЕТОДА (ЦВИА)

Название (рус.)

Состав и форма выпуска

Диагностический набор состоит из упакованного в коробку комплекта препаратов: Лиофилизированный иммуноглобулин (сыворотка) кролика (IgG, 10 - 20 мкг/0,1 мл), специфический к вирусу КЧС (№ 1) - 1 ампула, содержащая 0,1 мл; Лиофилизированный атенуированный вирус КЧС, штамм (№ 2) - ампула, содержащая 1 мл (0,5 lgИД 50/0,5 мл); Лиофилизированный положительный контрольный иммуноглобулин (IgG) сыворотки свиньи (№ 3) - 1 ампула, содержащая 0,2 мл; Лиофилизированный отрицательный контрольный иммуноглобулин (IgG) сыворотки свиньи (№ 4) - 1 ампула, содержащая 0,2 мл; Лиофилизированный конъюгат антител, специфических к IgG кролика, конъюгированных с пероксидазой хрена (№ 5) - 1 ампула, содержащая 0,2 мл; 0,05 М ацетатный буфер, pH 5 (№ 6) - 1 флакон - 10 мл; 1 М концентрат фосфатно-буферного раствора (ФБР), pH 7,2 - 7,4 (№ 7) - 1 флакон 6 мл. Детергент твин-20, жидкий (№ 8) - 1 флакон 6 мл; Детергент твин - 20, жидкий (№ 8) - 1 флакон 0,6 мл; Натрий хлористый (№ 9) - 1 флакон 5,1 г; n-диметил-формамид (№ 10) - 1 флакон 0,3 мл; 3-амино-9-этилкарбазол (АЭК) (№ 12) - 1 флакон 5 г; Сухое обезжиренное молоко (№ 12) - 1 флакон 5 г. Плоскодонные стерильные культуральные полистироловые планшеты 96-луночные - 1 шт. Компоненты выпускают в закрытых флаконах (ампулах).

Фармакологические свойства

Заключается в размножении вируса КЧС в чувствительной культуре клеток с последующим выявлением антигена в инфицированных клетках с помощью высокочувствительных, специфических реагентов. Специфический комплекс антиген-антитело в культуре инфицированных клеток может выявляться в двух вариантах постановки ЦВИА: а) с помощью специфических меченых антител (прямой вариант); б) с помощью специфических антител и конъюгата антивидовых меченых антител (непрямой вариант). Индикатором специфического иммунокомплекса антиген-антитело, образовавшегося на твердой фазе служит ковалентно связанный фермент (пероксидаза хрена), визуализируемый в результате реакции фермента с хромогенным субстратом, что позволяет учитывать реакцию под световым микроскопом или автоматическим спектрофотометром. На проведение исследования требуется 4 - 5 дней.

Показания

Для выявления вируса КЧС в крови и суспензии органов от павших или вынужденно убитых животных при подозрении на классическую чуму свиней. Метод позволяет определить биологическую активность (титр) вакцинного штамма вируса на различных стадиях изготовления вакцины, а также выявлять титр специфических нейтрализующих антител в сыворотке крови свиней и лабораторных животных. Расчет титра вируса и титра противовирусных антител в референтных и тестируемых сыворотках рассчитывают по таблицам с использованием метода Кербера.

Дозы и способ применения

Для выявления вируса классической чумы свиней берут пробы крови, кусочки селезенки, миндалин, лимфоузлов, грудной кости (костный мозг), почек и легких от 2 - 3 животных в первые 2 ч после гибели или вынужденного убоя больных или подозреваемых в заболевании. Материалом для исследования, кроме того, могут служить вируссодержащие инфицированные вирусом культуры при оценки сырья при производстве вакцины. Материал отбирают в стерильные флаконы, закрывают резиновыми пробкам, флаконы обрабатывают снаружи дезинфицирующим раствором. Отобранный материал консервируют растворами антибиотиков. На флаконы наклеивают этикетки с указанием вида животного, наименования материала и его количества, времени получения и почтового адреса отправителя и замораживают. Поступившие на исследование материалы освобождают от консервирующей жидкости 2 - 3-х кратным отмыванием в стерильном ФБР с антибиотиками, взвешивают, измельчают сначала ножницами, а затем в гомогенизаторе, смешивая 1 - 5 или 1 к 10 с питательной средой для культивирования клеток с добавлением антибиотиков Б 6 мкг/мл, неомицина с бацитрацином 150 мгк/мл. Полученную 10 - 20 % суспензию центрифугируют 10 минут при 2000 об/мин, собирают надосадочную жидкость, которая служит исследуемым материалом для выделения вируса. Суспензия инфицированных вирусом клеточных культур и аттенуированных культуральных вакцин исследуют в цельном виде. Культура клеток, используемая для репродукции вируса, должна быть проверена на отсутствие контаминаций вирусом диареи крупного рогатого скота. Сыворотку, используемую для выращивания культур клеток, также проверяют на отсутствие антигена и антител вируса диареи крупного рогатого скота. Проведению исследования испытуемого материала методом цитохимического варианта реагентов. Готовят фиксирующий раствор (в комплект не входит) для фиксации монослоя клеток после инкубации (в работе используют один из ниже перечисленных вариантов фиксирующего раствора №№ 1 - 4. № 1 CH3COCH - 300мл - ацетон; ФБР - 700 мл; БСА - 200 мг - бычий сывороточный альбумин. № 2 C2H5OH - атанол абсолютный. № 3 (extemp) HCO(CH)CHO - 0,025 мл - глутаровый альдегид; ФБР - до 100 мл. № 4 4 % р-р параформальдегида на ФБР. Содержимое флакона № 2 (лиофилизированный аттенуированный вирус КЧС, штамм ) следует растворить в 1 мл ростовой среды и приготовить рабочее разведение 100 - 300 ТЦД (довести содержимое флакона до 100 мл ростовой средой). Содержимое ампул с положительным (положительный контроль № 3) и отрицательными иммуноглобулинами свиньи к вирусу КЧС (отрицательный контроль № 4) растворяют в 0,2 мл культуральной среды. Содержимое флакона № 7 необходимо растворить в 600 мл бидистиллированной воды. В полученный раствор добавить из флакона № 9 хлористый натрий и из флакона № 8 Твин-8, получаем раствор ФБР-Твнн. В отдельную емкость отобрать 100 мл раствора ФБР-Твин и растворить в этом объеме буфера взятое из флакона № 12 сухое молоко. Полученный блокирующий раствор (ФБР-Твин-Молоко) используется для блокирования планшетов после фиксации и для приготовления разведений лиофилизированного иммуноглобулина кролика (сыворотки), специфического к вирусу КЧС (№ 1), антикроличьего конъюгата (№ 5) в разведении, указанном на этикетках. Оставшиеся 500 мл раствора ФБР-Твин используют для отмывки полистироловых планшетов. Субстрат-индикаторный раствор: содержимое флакона № 11 (АЭК) растворяют в содержимом флакона № 10. Полученный матричный раствор можно приготовить заранее и хранить в темноте при комнатной температуре. Перед использованием смешать 0,3 мл матричного раствора с 5 мл 0,05 М ацетатного буфера pH 5 (№ 6) и добавить 0,006 мл, H2O (в набор не входит). Приготовленный раствор АЭК должен быть прозрачным, желто-коричневого цвета, его необходимо защищать от прямого источника света (лучше использовать флакон из темного стекла). Выделение (титрация) вируса КЧС из патматериала. Готовят 100-кратный концентрат раствора антибиотиков и глутамина. Глутамин (2,92 г) растворяют в 50 мл дистиллированной воды (раствор А) и стерилизуют фильтрацией. Антибиотики: пенициллин 10 МЕ, стрептомицин - 1 г, микостатин 5 х 10 Е, полимиксин В 15 х 1 - Е и канамицин - 1 г, растворяют в 5 - 10 мл стерильной дистиллированной воды (раствор В). Растворы А и В смешивают и доводят стерильной дистиллированной водой до 100 мл, хранят до использования в аликвотах по 1 мл при минус 20 °C. В стерильных условиях отрезают 1 - 2 миндалины или селезенки, добавляют небольшое количество стерильного стеклянного песка с культуральной средой и тщательно гомогенизируют в стерильной ступке или стеклянном гомогенизаторе. Из гомогената готовят 20 % (вес/объем) суспензию на культуральной среде Игла МЕМ, добавляют 1 мл смеси глутамина с антибиотиками на каждые 10 мл суспензии гомогената ткани и инкубируют при комнатной температуре 1 ч. Суспензию осветляют низкоскоростным центрифугированием при 3000 - 6000 об/мин 15 минут. В работе используют супернатант. Монослой кульутуры клеток P - 15 трипсинизируют, суспензию клеток при 800 - 1000 об/мин 10 минут и ресуспендируют в ростовой среде (Игла МЕМ, 5 - 10 % фетальной сыворотки, свободной от антител к вирусу диареи крупного рогатого скота 0,2 мл смеси антибиотики с глутамином на 10 мл клеточной суспензии) до концентрации клеток 2 х 10 кл/см. Смешивают 1 часть супернатанта и 9 частей суспензии клеток и вносят в лунки 96-луночного планшета по 0,1 - 0,2 мл в лунку. При титрации вируса, в отдельной стерильной посуде готовят серийные разведения вируса на среде, используемой для культирования клеток, без сыворотки с антибиотиками. Как минимум готовят 6 - 8 последовательных разведений. Кратность и объем разведения могут варьировать в зависимости от поставленной задачи и объема исследуемого материала (количества образцов для тестирования). При кратности разведения 1: 2 шаг составляет 0,3 lg; 1 к 3 - 0,4 lg; 1 к 4 - 0,6 lg; 1 к 5 - 0,7 kg. Подготовленные разведения вируса переносят многоканальной пипетки с 2 наконечниками, не меняя наконечников, начиная с наивысшего разведения, в культуральные планшеты по 0,05 мл в лунку. Готовят суспензию и во все лунки планшета вносят по 0,05 мл суспензии на ростовой среде с концентрацией клеток 1 - 3 кл/мл. Планшет закрывают пластиковой крышкой или заклеивают скотчем, осторожно перемешивают и помещают в CO2-byre,fnjh ghb 37 С на 3 - 4 сут. Ежедневно просматривают планшеты под инвертированным микроскопом для исключения появления дегенерации клеток или ЦПД, вызванного контаминацией сопутствующими вирусами или бактериями. Определение титра нейтрализующих антител к вирусу КЧС в реакции нейтрализации. Все сыворотки, исследуемые в реакции нейтрализации, инактивируют при 56 C 30 минут. Скрининг на наличие антител к вирусу КЧС: разводят сыворотки 1/10 на ростовой среде и добавляют по 0,05 мл разведенной сыворотки по 2 лунки на образец. Контрольную сыворотку свиньи (ампула № 3) используют как положительный контроль в разведении 1/200. Определение титра вируснейтрализующих антител: Используют одну из перечисленных схем разведения сывороток крови свиней. А. - тест без контроля токсичности. На одной панели исследуют 24 сыворотки в двух разведениях 1 к 4 и 1 к 8, каждое, а во все лунки четных рядов вносят по 0,025 мл среды без сыворотки с антибиотиками. Затем в нечетные ряды вносят инактивированную сыворотку (разведение 1 к 4) в объеме 0,05 мл, а в четные ряды эту же сыворотку в объеме 25 мкл, получая разведение 1 к 8. Например, образец сыворотки № 1 вносят в объеме 0,05 мл в лунки A 1 и B 1 и в объеме 0,025 мл в лунки A 2 и B 2, сыворотку № 2 вносят в объеме 0,025 мл в лунки C 1 и D 1 и по 0,025 мл в лунки C 2 и D 2 и т. д. Для сыворотки 3, 4 и т. д. В. тест с контролем токсичности сыворотки. На одной панели исследуют 16 сывороток. Каждую сыворотку исследуют в двух разведениях, причем первое разведение одновременно служит контролем токсичности сыворотки. Во все лунки в колонках 1, 4, 7, 10 вносят по 0,05 мл среды без сыворотки с антибиотиками, лунки колонок 2, 5, 8, 11 оставляют свободными, а в лунки колонок 3, 6, 9, 12 вносят по 0,025 мл среды. Затем готовят соответствующие разведения сыворотки. Так например, для сыворотки № 1 в лунки A 1 и B 1 и в лунки A 2 и B 2 вносят по 0,05 мл инактивированной сыворотки, а в лунки A 3, B 3 по 0,025 мл, аналогично для сыворотки № 2 в лунки C 1 в лунки C 1, D 1и C 2 и D 2 вносят по 50 мкл инактивированной сыворотки, а в лунки C 3 и D 3 по 0,025 мл и т. д. для последующих образцов сыворотки. С. Более точным и воспроизводимым является следующая схема постановка реакции нейтрализации, при которой сыворотка исследуется в 4 разведениях. При этом панель разбивается на 12 кластеров, которые позволяют исследовать 12 сывороток, каждое разведение в двух повторах. При постановке данного варианта поступают следующим образом: ряды A и E оставляют свободными, а во все остальные вносят по 0,05 мл среды без сыворотки с антибиотиками. Для приготовления разведений в лунки рядов A и E вносят инактивированную сыворотку в разведении ¼ в объеме 0,1 мл. Далее, используют многоканальную пипетку методом переноса готовят серийные разведения, причем из последнего разведения (ряды B и H) для выравнивания объема удаляют 0,05 мл. Д. При исследовании сыворотки от иммунных животных после переболевания, вакцинации целесообразно использовать схему постановки реакции микронейтрализации (РМН). При схеме на одной панели исследуют 6 сывороток в 8 разведениях, в 2 повторах. При этом лунки ряда A оставляют свободным, а во все остальные лунки панели вносят по 0,05 мл среды без сыворотки с антибиотиками. Затем в ряд А и В вносят в двух повторах образцы сыворотки после инактивации в объеме 0,05 мл, и, начиная с ряда B, используя 12-канальную пипетку, методом переноса готовят серийные разведения с шагом 2. Из ряда H для выравнивания объема удаляют 0,05 мл последнего разведения. При подготовке серийных разведений сывороток для четырех вариантов на одной панели размещается: по варианту А - 24 сыворотки в 2 разведениях без контроля токсичности; по варианту В - 16 сывороток в 2 разведениях с контролем токсичности; по варианту С - 12 сывороток в 4 разведениях; по варианту Д - 6 сывороток в 8 разведениях. Вместо контролей на токсичность можно ставить контроль на активность вируса. Контрольную сыворотку свиньи (ампула № 3) используют как положительный контроль в разведении 1/200 или также подвергая титрации. В лунках с разведениями сывороток добавляют суспензию вируса КЧС в рабочем разведении, содержащем 100 - 300 ТЦД50 в 0,05 мл. Смесь антиген-антитела инкубируют 1 ч при температуре 37 °C. Готовят суспензию клеток и во все лунки планшета вносят по 0,05 мл суспензии на ростовой среде с концентрацией клеток 1 - 3X106 кл/мл. Планшет закрывают пластиковой крышкой из заклеивают скотчем, осторожно перемешивают и помещают в CO2 инкубатор при 37 °C на 3 - 4 суток. Ежедневно просматривают планшеты под инвертированным микроскопом для исключения появления дегенерации клеток или ЦПД, вызванного контаминацией сопутствующими вирусами или бактериями. Постановка ферментативной реакции. Фиксация клеток. После окончания инкубации удаляют поддерживающую среду и в лунки вносят ФБР для промывания монослоя клеток и после аккуратно удаляя. Вносят по 0,1 мл на лунку одного из перечисленных фиксирующих растворов: абсолютный этанол (охлажденный до минус 20 °C) на 45 минут или параформальдегида на 5 - 10 минут. Клетки, выращенные и зараженные на стекле, фиксируют охлажденным ацетоном. Фиксирующий раствор удаляют, а монослой на планшетах высушивают в термостате при 37 или 70 °C. Реакцию ставят через три часа (период, достаточный для полного высыхания поверхности фиксированных клеток). Планшеты можно хранить в герметически закрытых пакетах при минус 20 °C до момента их использования в работе. Постановка реакции. В лунки с фиксированными высушенными клетками добавляют по 0,1 мл блокирующего раствора на 30 минут 37 °C, удаляют содержимое лунок. Вносят положительную антисыворотку кролика к антигену КЧС в рабочем разведении на блокирующем растворе по 0,1 мл/лунка, планшеты инкубируют в термостате при 37 °C при помешивании 30 - 60 минут, удаляют содержимое лунок. Планшеты промывают 3 - 4 раза промывочным буфером (ФБР-Твин) комнатной температуры, удаляют содержимое лунок. Добавляют антикроличий пероксидазный конъюгат в рабочем разведении по 0,1 мл на лунку, инкубируют при 37 °C при помешивании 30 - 60 минут, удаляют содержимое лунок Планшеты промывают 3 - 4 раза промывочным буфером (ФБР-Твин) комнатной температуры, удаляя содержимое лунок. Добавляют свежеприготовленный субстрат 0,05 мл на лунку, инкубируют в термостате при 37 °C 15 - 30 минут. Когда цвет проявится достаточно интенсивно, раствор субстрата удаляют и добавляют H2O по 0,1 мл на лунку. Учет и оценка реакции. Учет реакции производят под инвертированным или обычным световым микроскопом при увеличении 5 х 20 и выше. Проводят оценку результатов по контрольным лункам планшета: положительный контроль при раститровке окрашивается в красно-коричневый цвет различной интенсивности. В лунках с отрицательным контролем поверхность клеток остается неокрашенной или незначительно розовеет. Цитоплазма клеток, инфицированных вирусом классической чумы свиней, будет окрашена в темно-красный, красно-коричневый цвет, а неинфицированные вирусом классической чумы свиней клетки будут иметь бледно-розовый оттенок или вообще не окрасятся. При визуальном учете сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемого вируса или сыворотки принимают последнее разведение, при котором наблюдают видимое окрашивание отдельных фокусов клеток монослоя в лунках. Поскольку в каждую лунку с разведениями сыворотки вносят разный объем вирусной суспензии (50 мкл), кратность разведения сыворотки УДВАИВАЕТСЯ. При оценке результатов без раститровок испытуемых проб вируса или сывороток, реакцию оценивают по принципу - - положительная реакция, в пробе выявлены антитела или вирус КЧС или - отрицательная реакция - в пробе отсутствует специфическая окраска (антитела к вирусу КЧС или вирус КЧС в пробах отсутствует).

Условия хранения

Не допускается хранение при минусовой температуре. Транспортируют при температуре от 2 °C до 8 °C. Срок годности - 12 месяцев.

Производитель

Продавец

СЫВОРОТКИ ЯЩУРНЫЕ ТИПО- И ШТАММОСПЕЦИФИЧЕСКИЕ ДЛЯ СЕРОЛОГИЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ЦЕЛЯХ

Название (рус.)

Состав и форма выпуска

Препарат представляет собой сыворотки крови морских свинок, гипериммунизированных вирусом ящура соответствующего типа и штамма. По внешнему виду представляют собой прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость от светло-желтого до темно-желтого (допускается красный или зеленоватый оттенки) цвета (нативный препарат) или сухую мелкопористую массу в виде таблетки светло-коричневого цвета. Выпускают в ампулах по 0,5 - 1 мл и упаковывают в картонные коробки с перегородками.

Показания

Для использования в реакции связывания комплемента (РСК), угнетения связывания комплемента (РУСК), диффузионной преципитации и иммунодиффузии (РДП, РРИД), энзиммеченных антител (ИФА, РЭМА) при контроле штаммовой специфичности ящурных антигенов, применяемых для выявления антител в сыворотке крови вакцинированных, переболевших или подозреваемых в переболевании животных, а также при выявлении и идентификации вируса ящура в патологическом материале.

Дозы и способ применения

Перед использованием сухую сыворотку разводят дистиллированной водой до объемов, указанных на этикетках. Вскрытые ампулы хранят при температуре не выше 6 °С и используют в течение суток.

Особые указания

Ампулы без этикеток, содержащие посторонние примеси, плесень, хлопья, не разбивающиеся при встряхивании, а также не использованные в течение суток после вскрытия, обеззараживают кипячением в течение 20 минут и утилизируют.

Условия хранения

Сыворотки пригодны в течение 18 месяцев (нативная форма) и 36 месяцев (сухая форма) со дня изготовления при условии хранения ее и транспортировки в сухом темном месте при температуре от 4 до 8 °С.

Производитель

Федеральный центр охраны здоровья животных ФГУ (ВНИИЗЖ ФГУ), Россия Адрес: 600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец. Тел.: (4922) 26-06-14 Тел./факс: (4922) 26-38-77 E-mail: mail@arriah.ru Подробнее о производителе

Продавец

СОМАТИК-ТЕСТ СМТ

Название (рус.)

СОМАТИК-ТЕСТ СМТ

Название (лат.)

Somatic-Test CMT

Состав и форма выпуска

Экспресс-диагностикум, предназначенный для определения количества соматических клеток в молоке и диагностики мастита у коров содержит: анионные ПАВы, консервант, индикатор цвета, воду очищенную. По внешнему виду Соматик-Тест СМТ представляет собой жидкость пурпурного цвета со специфическим запахом. Выпускают Соматик-Тест СМТ в пластиковых флаконах по 500 мл, 1 л.

Фармакологические свойства

Сульфонат, входящий в состав Соматик-Тест СМТ является поверхностно-активным веществом, которое, взаимодействуя с ДНК ядер соматических клеток молока, содержание которых увеличивается в молоке при наличии воспаления вымени, образует сгусток различной плотности в зависимости от количества соматических клеток. Одновременно в связи с изменением pH молока после добавления раствора под действием индикатора возможно изменение цвета смеси с серого или голубоватого на фиолетовый.По степени воздействия на организм Соматик-Тест СМТ относится к экологически безопасным средствам.

Показания

лечения путем постановки качественной реакции с образцом молока из разового удоя коровы во время контрольных доек. Исследования проводят с четвёртого дня после отела, в период лактации.

Дозы и способ применения

Исследования рекомендуется проводить на диагностических пластинах (планшетах). Первые струйки молока сцеживают, т.к. они содержат большое количество бактерий из канала соска. Сдаивают в лунки планшета по 2 мл молока из каждого соска. Далее к каждой порции диагностируемого молока добавляют по 2 мл Соматик-Теста СМТ и плавно, круговыми движениями, перемешивают 10-15 секунд.Реакцию учитывают по степени образования желеобразного сгустка, который является основным критерием оценки реакции, а также по дополнительному признаку — изменению цвета смеси. Реакция читается 10 секунд. Реакцию считают отрицательной (-), если смесь молока с Соматик-Тестом СМТ остается в виде однородной жидкости, а цвет смеси не меняется. Реакцию считают сомнительной (+/-), если смесь молока с диагностикумом незначительно загустевает или образует несформировавшееся желе, которое может снова перейти в жидкую фракцию через 10 секунд. Реакцию считают положительной (+), если смесь молока с диагностикумом образует сформировавшийся желеобразный сгусток, который легко выскальзывает из лунки и строго положительной (+++), если образуется плотный сгусток, с трудом выбрасываемый из лунки пластинки, при этом возможно изменение цвета до фиолетового. Чувствительность препарата: от 170 000 клеток. Таблица признаков Изменение консистенции пробы Результат (по каждой доли вымени) Количество соматических клеток в 1 мл молока Жидкость однородная, водянистая Отрицательный (-) Отсутствие мастита Менее 200.000 В целом однородная смесь. Появляется незначительная вязкость, которая скоро исчезает Сомнительный (+/-) Есть риск наличия мастита. Взять животное под наблюдение 200.000-500.000 Образование мягкого сгустка Положительный (+)Лечение 400.000 – 5.000.000 Плотный сгусток, прилипающий ко дну лунки Строго положительный (+++)Лечение Более 5.000.000

Особые указания

При применении Соматик-Теста СМТ следует соблюдать общие правила личной гигиены и техники безопасности, предусмотренные при работе с дезинфицирующими средствами. При попадании на кожу, в глаза и на слизистую оболочку немедленно промыть водой.Запрещается использование пустых флаконов из-под средства для бытовых целей.

Условия хранения

Соматик-Тест СМТ хранят в закрытой упаковке производителя, в сухом, защищенном от прямых солнечных лучей месте, в местах, недоступных для детей, отдельно от продуктов питания и кормов, при температуре не выше +25°С. Срок годности при соблюдении условий хранения в упаковке — 3 года со дня изготовления.Инструкция разработана ООО «Глобал-Вет» (г. Москва) совместно с фирмой «Диафарм а/с» (Дания).Организация-производитель фирма «Диафарм а/с», Flegmade 11 E, 7100 Vejle, Denmark.

НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ <РРСС-СЕРОТЕСТ>

Название (рус.)

НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ РЕПРОДУКТИВНО-РЕСПИРАТОРНОГО СИНДРОМА СВИНЕЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Состав и форма выпуска

В комплект входят: Планшет для иммуноферментного анализа с адсорбированным в лунках рекомбинантным антигеном rN вируса РРСС - 1 шт. Положительный контроль (K+), 1 мл - 1 фл. Отрицательный контроль (K-) - 1 мл - 1 фл. 20 концентрат фосфатно-солевого буфера с Твином 20 для промывки планшетов (ФСБТ), 4 мл - 2 фл. по 20 мл. Буфер для разведения сывороток (БР), 25 мл - 1 фл. Буфер для разведения конъюгата (БРК), 11 мл - 1 фл. Антитела к иммуноглобулину G(IgG) свиньи, меченые пероксидазой хрена (Конъюгат), 0,5 мл - 1 фл. Субстратный раствор с перекисью водорода для разведения хромогена (CP), 5,1 мл - 1 фл. Хромоген, тетраметилбензидин (ТМБ), 5,1 мл - 1 фл. 1 М Серная кислота (Стоп-раствор), 5,1 мл - 1 фл. Компоненты выпускают в закрытых флаконах. В наборе содержится все необходимые для проведения анализа реактивы, за исключением дистиллированной воды. В качестве дополнительного оборудования необходимы микропипетки на 10, 100, 200 и 1000 мкл, мерная лабораторная посуда, суховоздушный термостат с температурой 37 °C, спектрофотометр, с длиной волны 450 нм.

Фармакологические свойства

Основан на взаимодействии иммобилизованного на поверхности лунок планшета рекомбинантного белка вируса РРСС (rN) со специфическими антителами из исследуемой пробы сыворотки и последующем выявлении полученного комплекса конъюгатом (меченым пероксидазой хрена специфическим антителами к IgG свиньи). Связанная пероксидаза вызывает разложение находящейся в хромоген-субстратном растворе перекиси водорода и окисление хромогена. В лунках развивается окраска, интенсивность которой прямо пропорциональна количеству антител в определяемой пробе.

Показания

Предназначен для выявления антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) в сыворотке крови иммуноферментным методом с целью диагностики РРСС у невакцинированных животных и оценки напряженности иммунитета после вакцинации. Набор рассчитан для проведения на одном планшете одновременного анализа 46 исследуемых (в 2 повторах) и двух контрольных сывороток (в 2 повторах). Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения нескольких серий анализов по мере поступления биоматериала.

Дозы и способ применения

Подготовка биологического материала. Для анализа используют сыворотку крови свиней. Если анализ проводят в течение 24 ч после отбора, образцы биоматериала хранят при температуре 4 °С. При более длительном хранении образцы замораживают при минус 20 °С. Перед исследованием замороженные образцы быстро (в течение 5 - 10 минут) нагревают в водяной бане при температуре 37 С. В случае выпадения осадка пробы обязательно осветляют центрифугированием 10 минут при 2000 g. Многократное замораживание и оттаивание образцов не допускается. Подготовка рабочих растворов. Перед началом работы все реагенты выдерживают не менее 0,5 ч при комнатной температуре и тщательно перемешивают. Рабочий раствор буфера для отмывания планшетов ФСБТ. Содержимое флакона № 4 разводят в 20 раз свежеприготовленной дистиллированной водой. Пример: к 20 мл концентрата добавляют 380 мл воды. При необходимости использования части компонентов следует иметь в виду, что для обработки одного стрипа требуется примерно 30 мл рабочего раствора. Рабочий раствор стабилен при температуре 4 С в течение 3 суток. Рабочий хромоген-субстратный раствор. Раствор хромогена (ТМБ - флакон № 9) разводят субстратным раствором (СР, флакон № 8) в соотношении 1 к 1 и перемешивают. Пример: для получения 2 мл рабочего хромоген-субстратного раствора к 1 мл раствора ТМБ добавляют 1 мл субстратного раствора. Раствор готовят непосредственно перед использованием. Буфер для разведения сыворотки (БР), № 8 - готов к употреблению. Буфер для разведения конъюгата (БРК), № 6 - готов к употреблению. Положительный контроль (К+), № 2 - готов к употреблению. Отрицательный контроль (K-), № 3 - готов к употреблению. Раствор конъюгата (Конъюгат), № 7 - перед употреблением развести необходимое количество в 20 раз, например, к 0,25 мл конъюгата добавить 4,75 мл БРК. Стоп-раствор (1 М Серная кислота), № 10 - готов к употреблению. Проведение анализа. Исследуемые сыворотки разводят в 50 раз буфером для разведения сывороток (БР). Например, к 245 мкл БР добавляют 5 мкл исследуемой сыворотки. В лунки A 1 - B 1 вносят по 100 мкл K+. В лунки C 1 - D 1 вносят по 100 мкл K-. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл разведенной исследуемой сыворотки (по две лунки на каждый образец сыворотки). Закрывают планшет липкой пленкой и инкубируют 1 ч при 37°C. Планшет 5 раз промывают буфером ФСБТ (доверху заполняя лунки), каждый раз полностью удаляя жидкость постукиванием перевернутого планшета по фильтровальной бумаге. При этой операции возможно выпадение стрипов из рамки! Рекомендуется отмаркировать каждый стрип для восстановления из первоначального расположения. В каждую лунку добавляют по 100 мл раствора конъюгата. Планшет закрывают липкой пленкой и инкубируют 1 ч при 37°C. Планшет 5 раз промывают буфером ФСБТ. Добавляют в каждую лунку по 100 мкл рабочего хромоген-субстратного раствора. Планшет инкубируют в темноте 20 минут при комнатной температуре. Останавливают реакцию добавлением 50 мкл стоп-раствора (1МH2SO4). После остановки реакции оптическую плотность субстратной смеси измеряют на спектрофотометре с вертикальным лучом при длине волны 450 нм (A450). Учет и интерпретация результатов. Вычисляют среднее арифметическое значение оптической плотности (A450) для всех проб K+ (A450 K+ср). Вычисляют среднее арифметическое значение оптической плотности (A450) для всех проб K- (A450 K-ср).Вычисляют среднее значение оптической плотности (A450) для каждой опытной пробы (ОП) (A450 ОПср). Вычисляют коэффициент связывания (Kсв) конъюгата сывороточными антителами по формуле: Kсв = (A450 ОПср - A450 K-ср)/(A450 K+ср - A450 K-ср) х 100 Величина (A450 K+ср - A450 K-ср) является характеристикой работоспособности набора и должна составлять не менее 0,5. Если эта величина менее 0,5, к полученным результатам следует относиться как к сомнительным и, по возможности, повторить анализ. Пробу считают отрицательной, если величина KKсв менее 30 %. Если величина KKсв более 30 %, пробу считают положительной.

Особые указания

Буферные растворы и стандарты содержат токсические консерванты - мертиолят и азид натрия. Не допускайте попадания их внутрь и на слизистые оболочки. Серная кислота вызывает раздражение при попадании на кожу и слизистые оболочки. Так как развитие гуморального иммунитета начинается на 25 - 30 день после вакцинации, анализ на наличие антител к вирусу РРСС рекомендуется проводить через 25 дней после вакцинации. Для получения достоверных результатов, рекомендуется исследовать группы животных (не менее 10 голов), одинаковых по условиям содержания, возрасту и т. д. Не использовать объединенные сыворотки от разных животных.

Условия хранения

В сухом, темном месте при температуре от 2 до 8 °C и относительной влажности не более 80 %. Замораживание реагентов набора не допускается. Все компоненты набора стабильны до истечения срока годности. Оставшиеся после частичного использования компоненты должны храниться плотно закрытыми в заводской упаковке. Не переливать в другую посуду. Не смешивать компоненты из наборов разных серий.

Производитель

Продавец

НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ <КЧС-СЕРОТЕСТ>

Название (рус.)

НАБОР РЕАГЕНТОВ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КЛАССИЧЕСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Состав и форма выпуска

Планшет для иммуноферментного анализа с иммобилизованным рекомбинантным антигеном E2 вируса КЧС - 1 шт. Положительная сыворотка свиньи (К+), 0,5 мл - 1 фл. (прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость желто-красного цвета). 20 - кратный концентрат фосфатно-солевого буфера с Твином 20 для промывки планшетов (ФСБТ), 50 мл - 2 фл. по 25 мл. Буфер для разведения сывороток (БР), 10 мл - 1 фл. Конъюгат моноклональных антител к вирусу КЧС с пероксидазой хрена (Конъюгат), 10 мл - 1 фл (прозрачная жидкость розового цвета). Субстратный раствор с перекисью водорода для разведения хромогена (СР), 5 мл - 1 фл. Хромоген, тетраметилбензидин (ТМБ), 5 мл - 1 фл. 1 N Серная кислота (топ-раствор), 5 мл - 1 фл. В наборе содержатся все необходимые для проведения анализа реактивы, за исключением дистиллированной воды. В качестве дополнительного оборудования необходимы микропипетки вместимостью 10, 100, 200 и 1000 мкл, мерная лабораторная посуда, суховоздушный термостат с температурой 37 °C, спектрофотометр с длинной волны 450 нм.

Фармакологические свойства

Метод основан на конкурентном взаимодействия конъюгированных с пероксидазой моноклональных антител к оболочечному белку E2 вируса КЧС и сывороточной вирусспецифических антител с иммобилизованным на поверхности иммунологического планшета рекомбинантным белком E2. При отсутствии в исследуемой сыворотке вирусспецифических антител, моноклональный конъюгат свободно взаимодействует с иммобилизованным E2 и после добавления субстрата и хромогена в лунке развивается окраска. Если исследуемая сыворотка содержит вирусспецифические антитела, происходит их взаимодействие с иммобилизованным E2, его частичная или полная блокировка, в результате чего связывается конъюгата с антигеном, и, соответственно, интенсивность окраски снижается. Таким образом, интенсивность окраски обратно пропорциональна количеству антител в исследуемой сыворотке.

Показания

Для выявления антител к вирусу классической чумы свиней (КЧС) в сыворотке крови иммуноферментным методом с целью диагностики КЧС у невакцинированных животных и оценки напряженности иммунитета после вакцинации. Набор реагентов рассчитан для проведения на одном планшете одновременного анализа 46 исследуемых (в 2 повторах) и двух контрольных сывороток (в 2 повторах). Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения нескольких серий анализов по мере поступления биоматериала.

Дозы и способ применения

Подготовка биологического материла. Для анализа используют сыворотку крови. Образцы биоматериала хранят при температуре 4 °C, если анализ проводят не позднее 24 ч после отбора. Для более длительного хранения образцы замораживают и хранят при минус 20 °C. Замороженные образцы перед исследованием быстро (в течение 5 - 10 минут) размораживают нагреванием в водяной бане при температуре 37 °C. В случае выпадения осадка пробы обязательно осветляют центрифугированием 10 минут при 2000 g. Многократное замораживание и оттаивание образцов не допускается. Подготовка рабочих растворов. Перед началом работы все реагенты выдерживают не менее 0,5 ч при комнатной температуре и тщательно перемешивают. Рабочий раствор буфера для отмывания планшетов ФСБТ. Содержимое флакона № 4 разводят в 20 раз свежеприготовленной дистиллированной водой. Пример: к 20 мл концентрата добавляют 380 мл воды. При необходимости использования части компонентов следует иметь ввиду, что для обработки одного стрипа требуется примерно 20 мл рабочего раствора. Готовый рабочий раствор стабилен при температуре 4 °C в течение 7 суток. Рабочий хромоген-субстратный раствор. Раствор хромогена (ТМБ - флакон № 8) разводят субстратным раствором (СР, флакон № 7) в соотношении 1 к 1 и перемешивают. Пример: Для получения 2 мл рабочего хромоген-субстратного раствора к 1 мл раствора ТМБ добавляют 1 мл субстратного раствора. Раствор готовят непосредственно перед использованием. Буфер для разведения сыворотки (БР), № 5. Положительная сыворотка (K+), № 2. Отрицательная сыворотка (K-), № 3. Раствор конъюгата (Конъюгат), № 6. Стоп-раствор (1 Серная кислота), № 9 - готовы к употреблению. Проведения анализа. В лунки планшета вносят по 0,75 мл БР (из расчета по две лунки на каждый образец сыворотки и по 2 лунки для положительных и отрицательных контролей). В лунки A1 - B1 вносят по 0,05 мл K+.В лунки C1 - D1 вносят по 0,05 мл K-.В остальные лунки планшета с буфером БР вносят по 0,05 мл исследуемой сыворотки (по две лунки на каждый образец сыворотки). Закрывают планшет липкой пленкой и инкубируют 1,5 час при комнатной температуре. Планшет 5 раз промывают буфером ФСБТ (300 мкл/лунку), каждый раз полностью удаляя жидкость из лунок постукиванием перевернутого планшета по фильтровальной бумаге. При этой операции возможно выпадение стрипов из рамки! Рекомендуется отмаркировать каждый стрип для восстановления из первоначального расположения. В каждую лунку добавляют по 0,1 мл раствора конъюгата. Планшет закрывают липкой пленкой и инкубируют 45 минут при 37 °C. Планшет 5 раз промывают буфером ФСБТ (из расчета 300 мкл/лунку), каждый раз полностью удаляя жидкость из лунок путем постукивания перевернутого планшета по фильтровальной бумаге. Добавляют в каждую лунку по 0,1 мл рабочего хромоген-субстратного раствора. Планшет инкубируют в темноте 20 минут при температуре 18 - 22 °C. Останавливают реакцию добавлением 0,05 мл стоп-раствора (1NH2SO4). После остановки реакции оптическую плотность субстратной смеси измеряют на спектрофотометре с вертикальным лучом при длине волны 450 нм (A450). Учет и интерпретация результатов. Вычисляют среднее арифметическое значение оптической плотности (A450) для всех проб K+ (A450K+ср). Вычисляют среднее арифметическое значение оптической плотности (A450) для всех проб K- (A450K+ср). Вычисляют среднее значение оптической плотности (A450) для каждой опытной пробы (ОП) (A450ОПср).Вычисляют коэффициент ингибирования (Kинг) связывания конъюгата сывороточными антителами по формуле: Kинг = (A450K-ср - A450ОПср) / (A450K-ср - A450K+ср) x 100 Величина (A450K-ср - A450K+ср) является характеристикой работоспособности набора и должна составлять не менее 0,3. Если эта величина мене 0,3, к полученным результатам следует относиться как к сомнительным и, по возможности, повторить анализ. Пробу считают отрицательной, если величина Kинг менее 50 %. Если величина Kинг более 50 % пробу считают положительной. Если в сыворотке невакцинированного животного (исключая невакцинированных поросят от вакцинированных свиноматок, которые имеют колостральный иммунитет до 60 дневного возраста) обнаруживают антитела к вирусу КСЧ (Kинг выше50 %), это свидетельствует о контакте с вирусом и возможном заболевании. При исследовании напряженности поствакцинального иммунитета необходимо учитывать, что уровень вируснейтрализующих антител в сыворотке обеспечивает устойчивость животного к заражению вирулентным вирусом при Kинг выше 60 %. Так как развитие гуморального иммунитета начинается на 25 - 30 день после вакцинации, такой анализ рекомендуется проводить не ранее 25 дня после вакцинации.

Особые указания

Уровень антител к вирусу КЧС у животных может иметь существенные индивидуальные отличия. Для получения достоверных результатов, рекомендуется исследовать группы животных (не менее 10 голов), одинаковых по условиям содержания, возрасту и т. д. Не используйте объединенные сыворотки от разных животных. В случае сомнительных результатов рекомендуется повторить анализ тех же образцов сыворотки и применить другие методы анализа антител (реакцию нейтрализации или цитохимический вариант иммуноферментного анализа).

Условия хранения

В сухом, темном месте при температуре от 2 до 8 °C и относительной влажности не более 80 %. Срок годности набора - 12 месяцев. Замораживание ингредиентов комплекта не допускается. Все исходные компоненты набора стабильны до истечения срока годности. Оставшиеся после частичного использования компоненты должны храниться плотно закрытыми в заводской упаковке. Не переливать в другую посуду. Не смешивать компоненты из наборов разных серий.

Производитель

Продавец

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ СИНДРОМА СНИЖЕНИЯ ЯЙЦЕНОСКОСТИ-76 (ССЯ-76) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ ПРИ ТЕСТИРОВАНИИ СЫВОРОТОК В ОДНОМ РАЗВЕДЕНИИ

Название (рус.)

Состав и форма выпуска

В состав набора входят следующие компоненты. Иммуноспецифические компоненты: очищенный антиген вируса ССЯ 76, адсорбированный в лунках планшета для ИФА 2 планшета; гипериммунная сыворотка крови кур к вирусу ССЯ 76 (положительный контроль), цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета, 0,2 - 1 флакон; нормальная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ССЯ 76, цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета, 0,2 мл - 1 флакон; антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, лиофилизированный, сухая пористая масса белого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или концентрат раствора, прозрачная бесцветная жидкость, 3,0 мл - 1 флакон, рабочее разведение 1 : (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: концентрат буферного раствора для разведения испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата, бесцветная прозрачная жидкость, 32, 5 мл - 1 флакон; концентрат раствора для межэтапной промывки, бесцветная прозрачная жидкость, 130см - 1 флакон; раствор субстрата АБТС (2,2'-азино-ди[3-этил]бензтиазолинсульфоновая кислота) с перекисью водорода - зеленоватая прозрачная жидкость, 25,0 - 1 флакон; концентрированный 5-кратный - 5 % раствор додецилсульфата натрия, бесцветная прозрачная жидкость, 5 - 1 флакон. Допускается образование осадка белого цвета при хранении в холодильнике. Набор рассчитан на анализ 92 проб сывороток крови кур на каждом планшете. Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения исследований по мере поступления биологического материала.

Фармакологические свойства

Сущность метода заключается в выявлении комплекса антиген-антитело, образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации антител в исследуемом материале.

Показания

Для определения специфических гуморальных антител против вируса синдрома снижения яйценоскости 76 (ССЯ 76) в сыворотках крови чур иммуноферментным методом (ИФА) при исследовании в одном разведении.

Дозы и способ применения

Для постановки реакции используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки переменного объема до 0,02 мл, до 0,2 мл и до 1 мл со сменными наконечниками, мерную лабораторную посуду, пробирки для разведения проб, дистиллированную или деионизированную воду, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5) °С, бытовой холодильник, спектрофотометр (ридер) любой модели с фильтром на 405 - 410 нм для учетов результатов ИФА. Перед началом работы набор с компонентами выдерживают 30 минут при температуре 18 - 22 °С. Буфер для разведения проб, контрольных сывороток, антикуриного конъюгата. Содержимое флакона с концентратом буфера для разведения доводят дистиллированной водой до 250 мл. Рабочий раствор конъюгата. Содержимое флакона с лиофилизированным конъюгатом растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Для приготовления рабочего разведения конъюгата __ мл концентрата конъюгата доводят буфером для разведения до 10 мл (в расчете на 1 планшет). Содержимое флакона с лиофилизированной положительной контрольной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Содержимое флакона с лиофилизированной отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Промывочный буфер. Содержимое флакона с концентратом буфера для отмывки доводят дистиллированной или деионизированной водой до 1000 мл и тщательно перемешивают. . Концентрированный разводят в 5 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например, для получения 12,5 мл к 2,5 мл концентрата добавляют 10 мл воды). Расход на 1 планшету - 12,5 мл. Внимание! Если при хранении 5-кратного раствора образовался осадок, его необходимо прогреть при комнатной температуре или при температуре 37 °С до полного растворения осадка. Разведение испытуемых и контрольных сывороток. Все испытуемые и контрольные пробы сывороток разводят 1 : 400 буфером для разведения, используя для каждой пробы новый наконечник. С этой цепью к 0,0025 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл буфера для разведения и трижды пипетируют. Постановка реакции. Из комплекта набора берут планшет, сенсибилизированный антигеном вируса ССЯ 76. В лунки А1 - А2 вносят по 100 мкл подготовленного отрицательного контроля. В лунки А3 - А4 вносят по 100 мкл подготовленного положительного контроля. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл испытуемых проб сыворотки крови. Планшет накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С, после чего лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывавают промывочным буфером (по 300 мкл на лунку). Затем жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С. Трижды повторяют процедуру промывания. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата, накрывают крышкой и выдерживают 10 минут при температуре 22 - 28 °С. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 100 мкл подготовленного . Учет результатов анализа проводят инструментальным способом сразу же после остановки реакции, используя спектрофотометр (ридер) с вертикальным лучом света при длине волны 405 - 410 нм. Реакцию оценивают по отношению значений оптической плотности (ОП) испытуемой пробы (5) к значению оптической плотности положительного контроля (Р), что отражает относительное количество антител в исследуемых образцах. Среднее значение ОП отрицательных контролей должно быть не выше 0,150. Разница показателей между средним значением ОП положительного контроля и средним значением отрицательного контроля допустима в диапазоне 0,45 - 0,8. Если полученные значения выходят за пределы этих значений, результаты считаются недостоверными и реакцию повторяют. Расчет S/P отношения: S/P = (Значение ОП испыт. сыв-ки - ср. значение ОП отрицательного контроля)/(Ср. значение полож. контроля - ср. значение отрицательного контроля) Полученные значения 5/Р позволяют дифференцировать испытуемые сыворотки на положительные, отрицательные и сомнительные. Пробы сывороток со значениями S/Р ниже или равными 0,195 считаются отрицательными, если больше 0,337 - положительными. Расчет титра антител. Титр антител в исследуемых пробах сыворотки крови, разведенных 1 : 400, вычисляют по следующей формуле: Титр = аntilg (2,367 (lg S/P) + 4,162). Интерпретация результатов. По результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества положительных проб к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к синдрому снижения яйценоскости при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е., если в 80 и более процентах исследованных проб сывороток крови получены положительные результаты). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение антител у невакцинированной птицы свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ССЯ 76. В таких случаях через 21 - 30 дней проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинических и патологоанатомических признаков ССЯ 76 является осно ванием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболеванию.

Особые указания

Работу с химическими компонентами набора следует проводить очень осторожно. При попадании их на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды под краном. Использованные планшеты обеззараживают 3 % раствором хлорной извести или другими сильными окислителями. Запрещается прием пищи и воды, курение в помещении, где проводятся работы с компонентами набора. Флаконы и планшеты без этикеток, с нарушением целостности, изменением консистенции или цвета, наличием посторонних примесей подлежат выбраковке и утилизации.

Условия хранения

В сухом защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Не допускается замораживание компонентов! Срок годности - 12 месяцев.

Производитель

Продавец

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ СИНДРОМА СНИЖЕНИЯ ЯЙЦЕНОСКОСТИ-76 (ССЯ-76) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Название (рус.)

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ СИНДРОМА СНИЖЕНИЯ ЯЙЦЕНОСКОСТИ-76 (ССЯ-76) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Состав и форма выпуска

В состав набора входят 9 компонентов (К1 - К9). Иммуноспецифические компоненты: К1 - положительная к вирусу ССЯ-76 сыворотка крови кур (положительный контроль) цельная лиофилизированная,0,5 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); К2 - отрицательная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ССЯ-76, цельная, лиофилизированная, 0,5 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); КЗ - очищенный антиген вируса ССЯ-76, адсорбированный в лунках планшета для ИФА - 2 планшета; К4 - антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, сухой в объеме 0,5 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула, рабочее разведение 1 : (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: К5 - набор солей для приготовления буферного раствора для испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки: трис (оксиметил) аминометан - 0,97 г (К5.1), трис (оксиметил) аминометан гидрохлорид - 6,61 г (К5.2), натрий хлористый' - 11,7 г (К5.3); К6 - набор солей для приготовлений субстратного буфера: натрий фосфорнокислый двузамещенный - 5,37 г - 1 флакон (К6.1), лимонная кислота - 1,57 г - 1 флакон (К6.2); К7 - детергент твин 20, жидкий - 1 мл - 1 флакон; К8 - субстрат - ортофенилендиамин, 1 таблетка во флаконе; К9 - перекись водорода, гидроперит, таблетка 1 г - 1 шт. в упаковке. Набор рассчитан на проведение 176 анализов сывороток крови кур при исследовании в одном разведении 1 : 400, при раститровке сывороток от 1 : 100 до 1 : 12800 - на 20 анализов.

Фармакологические свойства

Показания

Для определения специфических антител против вируса снижения яйценоскости (ССЯ-76)в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФМ).

Дозы и способ применения

Для исследования в лабораторию доставляют из птицехозяйств сыворотки крови кур от 25 голов (по 0,2 - 0,3 мл). Пробы сывороток хранят в морозильной камере бытового холодильника. Для постановки метода ИФА используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки постоянного и переменного объема до 0,02 мл и до 0,2 мл со сменными наконечниками, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, рН метр, ридер любой модели для учетов результатов ИФА. Перед приготовлением рабочих растворов набор с компонентами выдерживают 30 минут, при комнатной температуре (20 - 22 °С). Раствор № 1. Содержимое флаконов К5.1, К5.2 и К5.3 растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и измеряют показание рН, которое должно быть в пределах 7,4 - 7,6. Затем в этот раствор вносят содержимое флакона К7, получая конечную концентрацию детергента 0,01 %. Данный раствор используют для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки. Раствор № 2. Фосфатно-цитратный буфер рН 4,9 - 5,0. Для приготовления буфера содержимое флакона К6.1 растворяют в 50 мл дистиллированной воды, содержимое флакона К6.2 также в 50 мл дистиллированной воды. Затем смешивают 24,3 мл раствора К6.1 с 25,7 мл раствора К6.2., добавляют 50 мл дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН 4,9 - 5,0 при необходимости добавляют кислый (К6.2) или щелочной (К6.1) компоненты. Раствор № 3. Содержимое флакона К1 растворяют в 1,0 мл раствора № 1. Готовят перед использованием. Сыворотка К1 в нативном виде готова для использования. Раствор № 4. Содержимое флакона К2 с отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 1,0 мл раствора № 1. Раствор № 4 готовят перед использованием. Сыворотка К2 в нативном виде готова для использования. Раствор № 5. Содержимое флакона К4 с антивидовым конъюгатом растворяют в 0,5 мл раствора № 1. Для получения рабочего разведения 1 : из этого флакона или из нативного препарата конъюгата отбирают мл на 10,0 мл раствора №1 (на 1 планшет), готовят перед использованием. Раствор № 6. 1 таблетку гидроперита растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Раствор № 7. Субстратно-индикаторная смесь. Содержимое флакона К8 (таблетку) растворяют в 20 мл раствора № 2, встряхивают до полного растворения и добавляют на каждые 10 мл этого раствора по 0,4 мл раствора № 6. Готовят раствор №7 непосредственно перед использованием. В связи с высокой токсичностью ОФД приготовление субстратно-индикаторной смеси проводить в резиновых перчатках, избегая попадания на кожу и слизистые оболочки. Постановка реакции. Из комплекта набора берут планшет (К3), в лунках которого адсорбирован очищенный антиген вируса ССЯ 76, и используют для постановки иммуноферментного метода. Разведение сывороток. Образцы исследуемых проб сывороток крови разводят 1 : 100 раствором № 1. С этой целью к 0,01 мл сыворотки крови кур добавляют 1,0 мл раствора № 1 и перемешивают. В лунки рядов планшета В1 - 12... Н1 - 12 вносят по 0,1 мл раствора № 1, а в лунки А2 - 11 вносят по 0,2 мл исследуемых проб сывороток крови, приготовленных, и проводят раститровку по вертикальным рядам, начиная с 1 : 100 до 1 : 12800. В лунки А1 и А12 вносят разведения 1 : 100 контрольных (отрицательной и положительной) сывороток и также проводят раститровку по вертикальным рядам. Из последних лунок Н1 - Н12 удаляют по 0,1 мл. При обнаружении высоких титров антител в испытуемых пробах проводят раститровку по горизонтальным рядам планшета. Планшет осторожно встряхивают, закрывают крышкой и переносят в термостат на 37 °С на 2 часа. Затем лунки планшета освобождают от содержимого путем вытряхивания и трехкратно промывают раствором № 1. Готовят раствор № 5 и вносят во все лунки планшета по 0,1 мл, затем опять помещают в термостат на 1 час и промывают. Готовят раствор № 7 и вносят во все лунки по 0,1 мл. Оставляют при комнатной температуре в темном месте 5 - 10 минут. Останавливают реакцию добавлением в каждую лунку 0,05 мл серной кислоты, приготовленной путем растворения 2 мл концентрированной серной кислоты в 10 мл дистиллированной воды (в наборе отсутствует). Учет результатов анализа проводят после остановки реакции одним из способов: визуально - по интенсивности окрашивания содержимого лунок планшета или инструментально - с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. При визуальном способе учета первоначально проводят оценку результатов по контрольным лункам планшета: положительный контроль ( при раститровке) окрашивается в желтый цвет различной интенсивности. В лунках с отрицательным контролем раствор остается неокрашенным или незначительно желтеет. При визуальном учете сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемой сыворотки принимают последнее разведение ее, при котором наблюдают цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательным контролем. Положительными считают пробы, начиная с 1 : 400 и выше. При оценке результатов без раститровок испытуемых сывороток реакцию расценивают по принципу - - положительная реакция - в пробе выявлены - обнаружены специфические антитела к вирусу ССЯ 76 или - отрицательная реакция - в пробе отсутствуют специфические антитела. Инструментальный фотометрический учет результатов анализа позволяет количественно оценить титры специфических антител в исследуемых пробах путем измерения значений оптической плотности (ОП 492 нм). Конечным разведением испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором оптическая плотность превышает таковую отрицательного контроля в 2 - 2,1 раза. Расчет титра сывороток при постановке реакции в одном разведении (1 : 400). Выявление специфических антител в сыворотках крови можно проводить и без раститровки испытуемых сывороток. В этом случае во все лунки планшета А2 - 12 ...Н2 - 12 вносят по 0,1 мл исследуемых проб сывороток в разведении 1 : 400 в одной или двух повторностях, используя по 1(2) лунки на каждую пробу. В две лунки В1, С1 вносят положительные, а в две последующие Д1, Е1 - отрицательные контроль ные сыворотки в разведении 1 : 400. Лунки F1, G1, H1 служат контролем конъюгата и заполняются по 0,1 мл раствором № 1. Учет результатов реакции проводится спектрофотометрически при длине волны 492 нм. Для предполагаемого варианта учета различия между средними значениями положительной и отрицательной контрольных сывороток (PСx - NСx) должно быть более 0,5. Значения оптической плотности для отрицательного контроля должны быть менее или равны 0,150. Наличие или отсутствие антител к вирусу ССЯ 76 определяют путем вычисления отношения средней оптической плотности испытуемой сыворотки при длине волны 492 нм к среднему значению оптической плотности (ОП) положительного контроля (S/Р). Положительная контрольная сыворотка стандартизована и имеет определенный титр антител к вирусу ССЯ 76. Если S/Р отношение меньше или равно 0,068 сыворотка будет считаться отрицательной. Если S/Р отношение в диапазоне 0,068 - 0,184 означает, что проба сомнительная. Если S/Р отношение больше чем 0,184, сыворотка содержит антитела к ССЯ 76. Конечное значение титра может быть подсчитано по S/Р отношению при разведении 1 : 400. Расчет титра. Расчет среднего значения ОП отрицательного контроля (NСx): (Значение В1 ОП(492) + Значение С1 ОП(492))/2 = NСxПример: (0,036 + 0,040)/2 = 0,038 (NСx = 0,038). Расчет среднего значения ОП положительного контроля (PСx): (Значение D1 ОП(492) + Значение E1 ОП(492))/2 = PСxПример: (0,564 + 0,600)/2 = 0,582 (PСx = 0,582). Расчет S/Р отношения: (ОП(492) испытуемой сыворотки - NСx) / (PСx - NСx) = S/P Пример: Значение образца = 0,351 (0,351 - 0,038)/(0,582 - 0,038) = 0,313/0,544 = 0,574 (Значение S/Р=0,575). Расчет титра. log10Титр = 1,436*(log10S/Р) + 4,126. Пример: S/Р отношение равно 0,575. log10Титр = 1,436*(log100,575) + 4,126. log10Титр = 1, 436* (-0,240)+ 4,126. log10Титр = 3,7814. Титр = 103,856 = 6045. Интерпретация результатов. По результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества проб с титром антител 1 : 800 и выше к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к синдрому снижения яйценоскости при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е., если в 80 и более процентах проб сывороток крови титр антител достигает значения 1 : 800 и выше). Птицу вакцинируют (ревакцинируют ) при напряженности иммунитета менее 80 %. Выявление специфических антител в сыворотках крови кур в титрах 1 : 400 и выше пробах сывороток различных возрастных групп птиц в 100 - 120, 150 - 180 и 200 - 270 дней, не вакцинированных против ССЯ 76, является основанием для постановки диагноза на болезнь кур ССЯ 76. При этом учитывают эпизоотическую ситуацию в хозяйстве, снижение яичной продуктивности в пик яйцекладки, снесение депигментированных, шероховатых, с истонченной скорлупой яиц, а также наличие клинических и патологоанатомических признаков заболевания. Обнаружение положительных проб сывороток крови при эпизоотическом исследовании кур, ранее не вакцинированных против ССЯ 76, свидетельствует о циркуляции в стаде возбудителя болезни и служит основанием для дополнительных исследований по уточнению диагноза и проведения оздоровительных мероприятий.

Особые указания

Ампулы, флаконы без этикеток, с трещинами, с измененной консистенцией подлежат выбраковке и обеззараживанию и утилизации.

Условия хранения

В защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Срок годности - 12 месяцев.

Производитель

Продавец

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ (НБ) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ ПРИ ТЕСТИРОВАНИИ СЫВОРОТОК В ОДНОМ РАЗВЕДЕНИИ

Название (рус.)

Состав и форма выпуска

В состав набора входят следующие компоненты. Иммуноспецифические компоненты: очищенный антиген вируса НБ, адсорбированный в лунках планшета для ИФА 2 планшета; гипериммунная сыворотка крови кур к вирусу НБ (положительный контроль), цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета, 0,2 мл - 1 флакон; нормальная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу НБ, цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета, 0,2 мл - 1 флакон; антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, лиофилизированный, сухая пористая масса белого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или концентрат раствора, прозрачная бесцветная жидкость, 3,0 мл - 1 флакон, рабочее разведение 1 : (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: концентрат буферного раствора для разведения испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата, бесцветная прозрачная жидкость, 32,5 мл - 1 флакон; концентрат раствора для межэтапной промывки, бесцветная прозрачная жидкость, 130 мл - 1 флакон; раствор субстрата АБТС (2,2'-азино-ди[3-этил]бензтиазолинсульфоновая кислота) с перекисью водорода - зеленоватая прозрачная жидкость, 25 мл - 1 флакон; концентрированный 5-кратный - 5 % раствор додецилсульфата натрия, бесцветная прозрачная жидкость, 5 мл - 1 флакон. Допускается образование осадка белого цвета при хранении в холодильнике. Набор рассчитан на анализ 92 проб сывороток крови кур на каждом планшете. Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения исследований по мере поступления биологического материала. Принцип действия. Сущность метода заключается в выявлении комплекса антиген-антитело, образовавшегося на поверхности лунок лолистиролового планшета. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации антител в исследуемом материале.

Фармакологические свойства

Для определения специфических гуморальных антител против вируса ньюкаслской болезни (НБ) в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФА) при исследовании в одном разведении.

Показания

Для постановки реакции используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки переменного объема до 0,02 мл, до 0,2 мл и до 1,0 мл со сменными наконечниками, мерную лабораторную посуду, пробирки для разведения проб, дистиллированную или деионизированную воду, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, спектрофотометр (ридер) любой модели с фильтром на 405 - 410 нм для учетов результатов ИФА. Перед началом работы набор с компонентами выдерживают 30 минут при температуре 18 - 22 °С. Буфер для разведения проб, контрольных сывороток, антикуриного конъюгата. Содержимое флакона с концентратом буфера для разведения доводят дистиллированной водой до 250 мл. Рабочий раствор конъюгата. Содержимое флакона с лиофилизированным конъюгатом растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Для приготовления рабочего разведения конъюгата __ мл концентрата конъюгата доводят буфером для разведения до 10 мл (в расчете на 1 планшет). Содержимое флакона с лиофилизированной положительной контрольной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Содержимое флакона с лиофилизированной отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Промывочный буфер. Содержимое флакона с концентратом буфера для отмывки доводят дистиллированной или деионизированной водой до 1000 мл и тщательно перемешивают. . Концентрированный разводят в 5 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например, для получения 12,5 мл к 2,5 мл концентрата добавляют 10 мл воды). Расход на 1 планшету - 12,5 мл. Внимание! Если при хранении 5 кратного раствора образовался осадок, его необходимо прогреть при комнатной температуре или при температуре 37 ° до полного растворения осадка. Разведение испытуемых и контрольных сывороток. Все испытуемые и контрольные пробы сывороток разводят 1 : 400 буфером для разведения, используя для каждой пробы новый наконечник. С этой целью к 0,0025 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл буфера для разведения и трижды пипетируют. Постановка реакции. Из комплекта набора берут планшет, сенсибилизированный антигеном вируса НБ. В лунки А1 - А2 вносят по 100 мкл подготовленного отрицательного контроля. В лунки А3 - А4 вносят по 100 мкл подготовленного положительного контроля. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл испытуемых проб сыворотки крови. Планшет накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С, после чего лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают промывочным буфером (по 300 мкл на лунку). Затем жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С. Трижды повторяют процедуру промывания. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата, накрывают крышкой и выдерживают 10 минут при температуре 22 - 28 °С. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 100 мкл подготовленного . Учет результатов анализа проводят инструментальным способом сразу же после остановки реакции, используя спектрофотометр (ридер) с вертикальным лучом света при длине волны 405 - 410 нм. Реакцию оценивают по отношению значений оптической плотности (ОП) испытуемой пробы (S) к значению оптической плотности положительного контроля (P), что отражает относительное количество антител в исследуемых образцах. Среднее значение ОП отрицательных контролей должно быть не выше 0,150. Разница показателей между средним значением ОП положительного контроля и средним значением отрицательного контроля допустима в диапазоне 0,4 - 0,9. Если полученные значения выходят за пределы этих значений, результаты считаются недостоверными и реакцию повторяют.

Дозы и способ применения

Особые указания

Условия хранения

В защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Не допускается замораживание компонентов. Срок годности набора - 12 месяцев.

Производитель

Продавец

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ ( НБ) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Название (рус.)

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ НЬЮКАСЛСКОЙ БОЛЕЗНИ ( НБ) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Состав и форма выпуска

В состав набора входят 9 компонентов (К1 - К9). Иммуноспецифические компоненты: К1 - положительная к вирусу НБ сыворотка крови кур (положительный контроль) цельная лиофилизированная, 1 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); К2 - отрицательная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу НБ, цельная, лиофилизированная, 1 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); КЗ - очищенный антиген вируса НБ, адсорбированный в лунках планшета для ИФА - 2 планшета; К4 - антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, сухой в объеме 0,5 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула, рабочее разведение 1: (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: К5 - набор солей для приготовления буферного раствора для испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки: трис (оксиметил) аминометан - 0,97 г (К5.1), трис (оксиметил) аминометан гидрохлорид - 6,61 г (К5.2), натрий хлористый' - 11,7 г (К5.3); К6 - набор солей для приготовлений субстратного буфера: натрий фосфорнокислый двузамещенный - 5,37 г - 1 флакон (К6.1), лимонная кислота - 1,57 г - 1 флакон (К6.2); К7 - детергент твин-20, жидкий - 1 мл - 1 флакон; К8 - субстрат - ортофенилендиамин, 1 таблетка во флаконе; К9 - перекись водорода, гидроперит, таблетка 1,0 г - 1 шт. в упаковке.

Фармакологические свойства

Сущность метода заключается в выявлении образовавшегося на поверхности лунок полистиролового планшета комплекса антиген-антитело. Специфический комплекс взаимодействует с антивидовым иммунопероксидазным конъюгатом против lgG кур и вызывает разложение субстрата, окрашивая содержимое лунок планшета. Для исследования в лабораторию доставляют из птицехозяйств сыворотки крови кур от 25 голов (по 0,2 - 0,3 мл). Пробы сывороток хранят в морозильной камере бытового холодильника. Набор рассчитан на проведение 176 анализов сывороток крови кур при исследовании в одном разведении 1 : 400, при раститровке сывороток от 1 : 100 до 1 : 12800 - на 20 анализов.

Показания

Для определения специфических антител против вируса ньюкаслской болезни (НБ) в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФМ).

Дозы и способ применения

Для постановки метода ИФА используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки постоянного и переменного объема до 0,02 мл и до 0,2 мл со сменными наконечниками, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, рН метр, ридер любой модели для учетов результатов ИФА. Перед приготовлением рабочих растворов набор с компонентами выдерживают 30 минут, при комнатной температуре (20 - 22 °С). Раствор № 1. Содержимое флаконов К5.1, К5.2 и К5.3 растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и измеряют показание рН, которое должно быть в пределах 7,4 - 7,6. Затем в этот раствор вносят содержимое флакона К7, получая конечную концентрацию детергента 0,01 %. Данный раствор используют для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки. Раствор № 2. Фосфатно-цитратный буфер рН 4,9 - 5,0. Для приготовления буфера содержимое флакона К6.1 растворяют в 50 мл дистиллированной воды, содержимое флакона К6.2 также в 50 мл дистиллированной воды. Затем смешивают 24,3 мл раствора К6.1 с 25,7 мл раствора К6.2, добавляют 50 мл дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН 4,9 - 5,0, при необходимости добавляют кислый (К6.2) или щелочной (К6.1) компоненты. Раствор № 3. Содержимое флакона К1 растворяют в 1,0 мл раствора № 1. Готовят перед использованием. Сыворотка К1 в нативном виде готова для использования. Раствор № 4. Содержимое флакона К2 с отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 1,0 мл раствора № 1. Раствор № 4 готовят перед использованием. Сыворотка К2 в нативном виде готова для использования. Раствор № 5. Содержимое флакона К4 с антивидовым конъюгатом растворяют в 0,5 мл раствора № 1. Для получения рабочего разведения 1 : из этого флакона или из нативного препарата конъюгата отбирают мл на 10 мл раствора №1 (на 1 планшет), готовят перед использованием. Раствор № 6. 1 таблетку гидроперита растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Раствор № 7. Субстратно-индикаторная смесь. Содержимое флакона К8 (таблетку) растворяют в 20 мл раствора № 2, встряхивают до полного растворения и добавляют на каждые 10 мл этого раствора по 0,4 мл раствора № 6. Готовят раствор № 7 непосредственно перед использованием. В связи с высокой токсичностью ОФД приготовление субстратно-индикаторной смеси проводить в резиновых перчатках, избегая попадания на кожу и слизистые оболочки. Постановка реакции - Из комплекта набора берут планшет (К3), в лунках которого адсорбирован очищенный антиген вируса НБ, и используют для постановки иммуноферментного метода. Разведение сывороток: образцы исследуемых проб сывороток крови разводят 1 : 100 раствором № 1. С этой целью к 0,01 мл сыворотки крови кур добавляют , 1,0 мл раствора № 1 и перемешивают. В лунки рядов планшета В1 - 12... Н1 - 12 вносят по 0,1 мл раствора № 1, а в лунки А2 - 11 вносят по 0,2 мл исследуемых проб сывороток крови, приготовленных по вышеописанному методу, и проводят раститровку по вертикальным рядам, начиная с 1 : 100 до 1 : 12800. В лунки А1 и А12 вносят разведения 1 : 100 контрольных (отрицательной и положительной) сывороток и также проводят раститровку по вертикальным рядам. Из последних лунок Н1 - Н12 удаляют по 0,1 мл. При обнаружении высоких титров антител в испытуемых пробах проводят раститровку по горизонтальным рядам планшета. Планшет осторожно встряхивают, закрывают крышкой и переносят в термостат на 37 °С на 2 часа. Затем лунки планшета освобождают от содержимого путем вытряхивания и трехкратно промывают раствором № 1. Готовят раствор № 5 по вышеописанному способу и вносят во все лунки планшета по 0,1 мл, затем опять помещают в термостат на 1 час и промывают как. Готовят раствор № 7 по вышеописанному способу и вносят во все лунки по 0,1 мл. Оставляют при комнатной температуре в темном месте 5 - 10 минут. Останавливают реакцию добавлением в каждую лунку 0,05 мл серной кислоты, приготовленной путем растворения 2 мл концентрированной серной кислоты в 10 мл дистиллированной воды (в наборе отсутствует). Учет результатов анализа проводят после остановки реакции одним из способов: визуально - по интенсивности окрашивания содержимого лунок планшета или инструментально - с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. При визуальном способе учета первоначально проводят оценку результатов по контрольным лункам планшета: положительный контроль при раститровке окрашивается в желтый цвет различной интенсивности. В лунках с отрицательным контролем раствор остается неокрашенным или незначительно желтеет. При визуальном учете сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемой сыворотки принимают последнее разведение ее, при котором наблюдают видимое глазом цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательным контролем. Инструментальный фотометрический учет результатов анализа позволяет количественно оценить титры специфических антител в исследуемых пробах путем измерения значений оптической плотности (ОП 492 нм). Конечным разведением испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором оптическая плотность превышает таковую отрицательного контроля в 2,0 - 2,1 раза. Расчет титра сывороток при постановке реакции в одном разведении 1 : 400. Выявление специфических антител в сыворотках крови можно проводить и без раститровки испытуемых сывороток. В этом случае во все лунки планшета А2 - 12 ...Н2 - 12 вносят по 0,1 мл исследуемых проб сывороток в разведении 1 : 400 в одной или двух повторностях, используя по 1(2) лунки на каждую пробу. В две лунки В1, С1 вносят положительные, а в две последующие Д1, Е1 - отрицательные контрольные сыворотки в разведении 1 : 400. Лунки F1, G1, H1 служат контролем конъюгата и заполняются по 0,1 мл раствором № 1. Учет результатов реакции проводится спектрофотометрически при длине волны 492 нм. Для предполагаемого варианта учета различия между средними значениями по ложительной и отрицательной контрольных сывороток (РСХ - NСх) должно быть более 0,5. Значения оптической плотности для отрицательного контроля должны быть менее или равны 0,150. Наличие или отсутствие антител к вирусу ньюкаслской болезни определяют путем вычисления отношения средней оптической плотности испытуемой сыворотки при длине волны 492 нм к среднему значению оптической плотности (ОП) положительного контроля (S/Р). Положительная контрольная сыворотка стандартизована и имеет определенный титр антител к вирусу ньюкаслской болезни. Если S/Р отношение меньше или равно 0,15, сыворотка будет считаться отрицательной. Если S/Р отношение больше, чем 0,15, сыворотка содержит антитела к ньюкаслской болезни. Конечное значение титра может быть подсчитано по S/Р-отношению при разведении 1 : 400. Расчет титра - Расчет среднего значения ОП отрицательного контроля (NСх): (Значение В1 ОП(492) + Значение С1 ОП(492))/2 = NСхПример: (0,100 + 0,120)/2 = 0,110 (NСx = 0,110) Расчет среднего значения ОП положительного контроля (РСх): (Значение D1 ОП(492) + Значение E1 ОП(492))/2 = PCxПример: (0,720 + 0,690)/2 = 0,755 (PCx = 0,755) Расчет S/Р отношения: (ОП(492) испытуемой сыворотки - NСх)/(PCx - NCx) = S/P Пример: Значение образца = 0,480 (0,480 - 0,110) / (0,755 - 0,110) = 0,370/0,645 = 0,574 (Значение S/Р = 0,574) Расчет титра. log10 Титр = 1,08(log10 S/Р) + 3,92. Пример: S/Р отношение равно 0,574. log10 Титр = 1,08(log10 0,574) + 3,92. log10 Титр = 1,08(-0,241)+3,92. log10 Титр= 3,660. Титр=103,660 =4571. Интерпретация результатов -по результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества проб с титром антител 1 : 800 и выше к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к ньюкаслской болезни при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е. если в 80 и более процентах проб сывороток крови титр антител достигает значения 1 : 800 и выше). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение высокого уровня антител (более 1 : 12800) свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ньюкаслской болезни. В таких случаях через 21 - 30 дней проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Снижение или стабилизация уровня антител и (или) уменьшение количества птиц с высоким уровнем антител при повторных исследованиях проб сывороток крови свидетельствует об отсутствии циркуляции в хозяйстве эпизоотического вируса и является следствием поствакцинальных реакций. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при отсутствии клинических и патологоанатомических признаков НБ не является основанием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболеванию, но предусматривает установления за птицей тщательного наблюдения, проведением систематических серологических и вирусологических исследований. Обнаружение антител к вирусу ньюкаслской болезни у птиц, не привитых против НБ без клинических и патологоанатомических признаков заболевания свидетельствует о циркуляции природ неослабленных или вакцинных штаммов вируса ньюкаслской болезни и не является основанием для объявления хозяйства неблагополучным по НБ.

Особые указания

Ампулы, флаконы без этикеток, с трещинами, с измененной консистенцией подлежат выбраковке, обеззараживанию и утилизации.

Условия хранения

В защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Срок годности - 12 месяцев.

Производитель

Продавец

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ (ИББ) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ ПРИ ТЕСТИРОВАНИИ СЫВОРОТОК В ОДНОМ РАЗВЕДЕНИИ

Название (рус.)

Состав и форма выпуска

В состав набора входят следующие компоненты - иммуноспецифические: очищенный антиген вируса ИББ, адсорбированный в лунках планшета для ИФА 2 планшета; гипериммунная сыворотка крови кур к вирусу ИББ (положительный контроль), цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета, 0,2 мл - 1 флакон; нормальная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ИББ, цельная лиофилизированная - сухая пористая масса белого или светло-желтого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или нативная - прозрачная жидкость желтого или красноватого цвета, 0,2 мл - 1 флакон; антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, лиофилизированный, сухая пористая масса белого цвета, 0,5 мл - 1 флакон, или концентрат раствора, прозрачная бесцветная жидкость, 3,0 мл - 1 флакон, рабочее разведение 1 : (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: концентрат буферного раствора для разведения испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата, бесцветная прозрачная жидкость, 32,5 мл - 1 флакон; концентрат раствора для межэтапной промывки, бесцветная прозрачная жидкость, 130 мл - 1 флакон; раствор субстрата АБТС (2,2'-азино-ди[3-этил]бензтиазолинсульфоновая кислота) с перекисью водорода - зеленоватая прозрачная жидкость, 25 мл - 1 флакон; концентрированный 5-кратный - 5 % раствор додецилсульфата натрия, бесцветная прозрачная жидкость, 5 мл - 1 флакон. Допускается образование осадка белого цвета при хранении в холодильнике. Набор рассчитан на анализ 92 проб сывороток крови кур на каждом планшете. Компоновка набора допускает возможность дробного использования компонентов для проведения исследований по мере поступления биологического материала.

Фармакологические свойства

Показания

Для определения специфических гуморальных антител против вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ) в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФА) при исследовании в одном разведении.

Дозы и способ применения

Для постановки реакции используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки переменного объема до 0,02 мл, до 0,2 мл и до 1,0 мл со сменными наконечниками, мерную лабораторную посуду, пробирки для разведения проб, дистиллированную или деионизированную воду, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, спектрофотометр (ридер) любой модели с фильтром на 405 - 410 нм для учетов результатов ИФА. Приготовление рабочих растворов. Перед началом работы набор с компонентами выдерживают 30 минут при температуре 18 - 22 °С. Буфер для разведения проб, контрольных сывороток, антикуриного конъюгата. Содержимое флакона с концентратом буфера для разведения доводят дистиллированной водой до 250 мл. Рабочий раствор конъюгата. Содержимое флакона с лиофилизированным конъюгатом растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Для приготовления рабочего разведения конъюгата __ мл концентрата конъюгата доводят буфером для разведения до 10 мл (в расчете на 1 планшет). Содержимое флакона с лиофилизированной положительной контрольной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Содержимое флакона с лиофилизированной отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 0,5 мл буфера для разведения проб. Готовят перед использованием. Сыворотки в нативном виде готовы к использованию. Промывочный буфер. Содержимое флакона с концентратом буфера для отмывки доводят дистиллированной или деионизированной водой до 1000 мл и тщательно перемешивают. . Концентрированный разводят в 5 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например для получения 12,5 мл к 2,5 мл концентрата добавляют 10 мл воды). Расход на 1 планшету - 12,5 мл. Внимание! Если при хранении 5 кратного раствора образовался осадок, его необходимо прогреть при комнатной температуре или при температуре 37 °С до полного растворения осадка. Разведение испытуемых и контрольных сывороток. Все испытуемые и контрольные пробы сывороток разводят 1 : 400 буфером для разведения, используя для каждой пробы новый наконечник. С этой целью к 0,0025 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл буфера для разведения и трижды пипетируют. Постановка реакции - Из комплекта набора берут планшет, сенсибилизированный антигеном вируса ИББ. В лунки А1 - А2 вносят по 100 мкл подготовленного отрицательного контроля. В лунки АЗ - А4 вносят по 100 мкл подготовленного положительного контроля. В остальные лунки планшета вносят по 100 мкл испытуемых проб сыворотки крови. Планшет накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С, после чего лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают промывочным буфером (по 300 мкл на лунку). Затем жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл рабочего раствора конъюгата, накрывают крышкой и выдерживают 30 минут при температуре 37 °С. Трижды повторяют процедуру промывания. Во все используемые лунки планшета вносят по 100 мкл раствора субстрата, накрывают крышкой и выдерживают 10 минут при температуре 22 - 28 °С. Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 100 мкл подготовленного . Учет результатов анализа проводят инструментальным способом сразу же после остановки реакции, используя спектрофотометр (ридер) с вертикальным лучом света при длине волны 405 - 410 нм. Реакцию оценивают по отношению значений оптической плотности (ОП) испытуемой пробы (S) к значению оптической плотности положительного контроля (P), что отражает относительное количество антител в исследуемых образцах. Среднее значение ОП отрицательных контролей должно быть не выше 0,150. Разница показателей между средним значением ОП положительного контроля и средним значением отрицательного контроля допустима в диапазоне 0,400 - 0,900. Если полученные значения выходят за пределы этих значений, результаты считаются недостоверными и реакцию повторяют. Расчет S/Р-отношения: S/P = (Значение ОП испыт. сыв-ки - ср. значение ОП отрицательного контроля)/(Ср. значение полож. контроля - ср. значение отрицательного контроля) Полученные значения S/Р позволяют дифференцировать испытуемые сыворотки на положительные, отрицательные и сомнительные. Пробы сывороток со значениями S/Р ниже или равными 0,172 считаются отрицательными. Расчет титра антител. Титр антител в исследуемых пробах сыворотки крови, разведенных 1:400, вычисляют по следующей формуле: Титр = аntilg (1,714 (lg S/Р) + 3,855). Интерпретация результатов - по результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества положительных проб к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к ИББ при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е., если в 80 и более процентах исследованных проб сывороток крови получены положительные результаты). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение антител у невакцинированной птицы свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ИББ. В таких случаях через 21 - 30 дней проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинических и патологоанатомических признаков ИББ является основанием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболевани ю.

Особые указания

Условия хранения

В сухом защищенном от света месте и температуре от 2° до 8 °С. Не допускается замораживание компонентов. Срок годности набора - 12 месяцев.

Производитель

Продавец

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ (ИББ) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Название (рус.)

НАБОР ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ ИНФЕКЦИОННОЙ БУРСАЛЬНОЙ БОЛЕЗНИ (ИББ) ИММУНОФЕРМЕНТНЫМ МЕТОДОМ

Состав и форма выпуска

В состав набора входят 9 компонентов (К1 - К9). Иммуноспецифические компоненты: К1 - положительная к вирусу ИББ сыворотка крови кур (положительный контроль) цельная лиофилизированная, 1 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); К2 - отрицательная сыворотка крови кур (отрицательный контроль), не содержащая антител к вирусу ИББ, цельная, лиофилизированная, 1 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула (флакон); К3 - очищенный антиген вируса ИББ, адсорбированный в лунках планшета для ИФА - 2 планшета; К4 - антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против lgG кур, сухой в объеме 0,5 мл или в нативном виде - 0,2 мл - 1 ампула, рабочее разведение 1 : (указывается для каждой серии). Неспецифические компоненты: К5 - набор солей для приготовления буферного раствора для испытуемых и контрольных проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки: трис (оксиметил) аминометан - 0,97 г (К5.1), трис (оксиметил) аминометан гидрохлорид - 6,61 г (К5.2), натрий хлористый - 11,7 г (К5.3); К6 - набор солей для приготовлений субстратного буфера: натрий фосфорнокислый двузамещенный - 5,37 г - 1 флакон (К6.1), лимонная кислота - 1,57 г - 1 флакон (К6.2); К7 - детергент твин 20, жидкий - 1 мл - 1 флакон; К8 - субстрат - ортофенилендиамин, 1 таблетка во флаконе; К9 - перекись водорода, гидроперит, таблетка 1 г - 1 шт. в упаковке. Набор рассчитан на проведение 176 анализов сывороток крови кур при исследовании в одном разведении 1 : 400, при раститровке сывороток от 1 : 100 до 1 : 12800 - на 20 анализов.

Фармакологические свойства

Показания

Для определения специфических антител против вируса инфекционной бурсальной болезни (ИББ) в сыворотках крови кур иммуноферментным методом (ИФМ).

Дозы и способ применения

Для исследования в лабораторию доставляют из птицехозяйств сыворотки крови кур от 25 голов (по 0,2 - 0,3 мл). Пробы сывороток хранят в морозильной камере бытового холодильника. Для постановки метода ИФА используют: одно- и восьмиканальные автоматические пипетки постоянного и переменного объема до 0,02 мл и до 0,2 мл со сменными наконечниками, термостат с температурой нагрева (37 + 0,5 °С), бытовой холодильник, рН метр, ридер любой модели для учетов результатов ИФА. Перед приготовлением рабочих растворов набор с компонентами выдерживают 30 минут, при комнатной температуре (20 - 22 °С). Раствор № 1. Содержимое флаконов К5.1, К5.2 и К5.3 растворяют в 1000 мл дистиллированной воды и измеряют показание рН, которое должно быть в пределах 7,4 - 7,6. Затем в этот раствор вносят содержимое флакона К7, получая конечную концентрацию детергента 0,01 %. Данный раствор используют для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб, антивидового конъюгата и межэтапной промывки. Раствор № 2. Фосфатно-цитратный буфер рН 4,9 - 5. Для приготовления буфера содержимое флакона К6.1 растворяют в 50 мл дистиллированной воды, содержимое флакона К6.2 также в 50 мл дистиллированной воды. Затем смешивают 24,3 мл раствора К6.1 с 25,7 мл раствора К6.2., добавляют 50 мл дистиллированной воды. Полученный раствор должен иметь рН 4,9 - 5, при необходимости добавляют кислый (К6.2) или щелочной (К6.1) компоненты. Раствор № 3. Содержимое флакона К1 растворяют в 1 мл раствора № 1. Готовят перед использованием. Сыворотка К1 в нативном виде готова для использования по вышеописанному способу. Раствор № 4. Содержимое флакона К2 с отрицательной сывороткой крови кур растворяют в 1 мл раствора № 1. Раствор №4 готовят перед использованием. Сыворотка К2 в нативном виде готова для использования по вышеописанному способу. Раствор № 5. Содержимое флакона К4 с антивидовым конъюгатом растворяют в 0,5 мл раствора № 1. Для получения рабочего разведения 1 : из этого флакона или из нативного препарата конъюгата отбирают мл на 10 мл раствора № 1 (на 1 планшет), готовят перед использованием. Раствор № 6. 1 таблетку гидроперита растворяют в 20 мл дистиллированной воды. Раствор № 7. Субстратно-индикаторная смесь. Содержимое флакона К8 (таблетку) растворяют в 20 мл раствора № 2, встряхивают до полного растворения и добавляют на каждые 10 мл этого раствора по 0,4 мл раствора № 6. Готовят раствор № 7 непосредственно перед использованием. В связи с высокой токсичностью ОФД приготовление субстратно-индикаторной смеси проводить в резиновых перчатках, избегая попадания на кожу и слизистые оболочки. Постановка реакции. Из комплекта набора берут планшет (К3), в лунках которого адсорбирован очищенный антиген вируса ИББ, и используют для постановки иммуноферментного метода. Разведение сывороток. Образцы исследуемых проб сывороток крови разводят 1 : 100 раствором № 1. С этой целью к 0,01 мл сыворотки крови кур добавляют 1 мл раствора № 1 и перемешивают. В лунки рядов планшета В1 - 12... Н1 - 12 вносят по 0,1 мл раствора № 1, а в лунки А2 - 11 вносят по 0,2 мл исследуемых проб сывороток крови, приготовленных по вышеописанной схеме, и проводят раститровку по вертикальным рядам, начиная с 1 : 100 до 1 : 12800. В лунки А1 и А12 вносят разведения 1 : 100 контрольных (отрицательной и положительной) сывороток и также проводят раститровку по вертикальным рядам. Из последних лунок Н1 - Н12 удаляют по 0,1 мл. При обнаружении высоких титров антител в испытуемых пробах проводят раститровку по горизонтальным рядам планшета. Планшет осторожно встряхивают, закрывают крышкой и переносят в термостат на 37 °С на 2 часа. Затем лунки планшета освобождают от содержимого путем вытряхивания и трехкратно промывают раствором № 1. Готовят раствор № 5 по вышеописанной схеме и вносят во все лунки планшета по 0,1 мл, затем опять помещают в термостат на 1 час и промывают. Готовят раствор № 7 по вышеописанной схеме и вносят во все лунки по 0,1 мл. Оставляют при комнатной температуре в темном месте 5 - 10 минут. Останавливают реакцию добавлением в каждую лунку 0,05 мл серной кислоты, приготовленной путем растворения 2 мл концентрированной серной кислоты в 10 мл дистиллированной воды (в наборе отсутствует). Учет результатов анализа проводят после остановки реакции одним из способов: визуально - по интенсивности окрашивания содержимого лунок планшета или инструментально - с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом при длине волны 492 нм. При визуальном способе учета первоначально проводят оценку результатов по контрольным лункам планшета: положительный контроль при раститровке окрашивается в желтый цвет различной интенсивности. В лунках с отрицательным контролем раствор остается неокрашенным или незначительно желтеет. При визуальном учете сравнивают окраску содержимого лунок планшета испытуемых проб с окраской лунок контрольных образцов. За титр испытуемой сыворотки принимают последнее разведение ее, при котором наблюдают видимое глазом цветовое окрашивание, более интенсивное по сравнению с отрицательным контролем. Инструментальный фотометрический учет результатов анализа позволяет количественно оценить титры специфических антител в исследуемых пробах путем измерения значений оптической плотности (ОП 492 нм). Конечным разведением испытуемой сыворотки считается последнее ее разведение, в котором оптическая плотность превышает таковую отрицательного контроля в 2,0 - 2,1 раза. Расчет титра сывороток при постановке реакции в одном разведении 1 : 400. Выявление специфических антител в сыворотках крови можно проводить и без раститровки испытуемых сывороток. В этом случае во все лунки планшета А2 - 12 ...Н2 - 12 вносят по 0,1 мл исследуемых проб сывороток в разведении 1 : 400 в одной или двух повторностях, используя по 2 лунки на каждую пробу. В две лунки В1, С1 вносят положительные, а в две последующие Д1, Е1 - отрицательные контрольные сыворотки в разведении 1 : 400. Лунки F1, G1, H1 служат контролем конъюгата и заполняются по 0,1 мл раствором № 1. Учет результатов реакции проводится спектрофотометрически при длине волны 492 нм. Для предполагаемого в арианта учета различия между средними значениями положительной и отрицательной контрольных сывороток (PCx - NCx) должно быть не менее 0,4. Значения оптической плотности для отрицательного контроля должны быть менее или равны 0,150. Наличие или отсутствие антител к вирусу ИББ определяют путем вычисления отношения средней оптической плотности испытуемой сыворотки при длине волны 492 нм к среднему значению оптической плотности (ОП) положительного контроля (S/Р). Положительная контрольная сыворотка стандартизована и имеет определенный титр антител к вирусу ИББ. Если S/Р отношение меньше или равно 0,13, сыворотка будет считаться отрицательной. Если S/Р отношение находится в диапазоне значений 0,13 - 0,17, сыворотка считается сомнительной. Если S/Р отношение больше чем 0,17, проба считается положительной. Конечное значение титра может быть подсчитано по S/Р-отношению при разведении 1 : 400. Расчет среднего значения ОП отрицательного контроля (NCx): (Значение В1 ОП(492) + Значение С1 ОП(492))/2 = NCxПример: (0,100 + 0,120)/2 = 0,110 (NCx = 0,110). Расчет среднего значения ОП положительного контроля (PCx): (Значение D1 ОП(492) + Значение E1 ОП(492))/2 = PCxПример: (0,720 + 0,690)/2 = 0,755 (PСx = 0,755). Расчет S/Р отношения: (ОП(492) испытуемой сыворотки - NCx)/(PCx - NCx) = S/P Пример: Значение образца = 0,480 (0,480 - 0,110)/(0,755 - 0,110) = 0,370/0,645 = 0,574 (Значение S/Р = 0,574). Расчет титра: log10Титр = 2,01(log10S/Р) + 3,98. Пример: S/Р отношение равно 0,574 log10Титр = 1,08(log100,574) + 3,98. log10Титр = 1,08(-0,241)+3,98. log10Титр = 3,660. Титр = 103,660 = 4571. Интерпретация результатов. По результатам ИФА определяют напряженность иммунитета в партии привитых цыплят путем деления количества проб с титром антител 1 : 400 и выше к общему количеству исследованных сывороток и выражают в процентах. Птицу считают иммунной к вирусу ИББ при напряженности иммунитета 80 и более процентов (т. е. если в 80 и более процентах проб сывороток крови титр антител достигает значения 1 : 400 и выше). Птицу вакцинируют (ревакцинируют) при напряженности иммунитета менее 80 %. Обнаружение высокого уровня антител более 1 : 400 свидетельствует о возможной циркуляции в стаде полевого вируса ИББ. В таких случаях через 21 - 30 дней проводят повторное исследование проб сывороток крови, полученных от этих же птиц. Нарастание титров и (или) увеличение количества птиц с высоким уровнем антител при наличии клинических и патологоанатомических признаков ИББ является основанием для объявления в хозяйстве неблагополучия по данному заболеванию.

Особые указания

Условия хранения

В защищенном от света месте и температуре от 2 до 8 °С. Срок годности набора - 12 месяцев.

Производитель

Продавец

Находим решения для любой задачи.
Просто расскажите нам о ней!